[发明专利]一种基于定量PCR技术的GSTM1分型检测方法

权利要求书

1.一种基于定量PCR技术的GSTM1分型检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）采用二代测序验证的人GSTM1正常纯合子、杂合子和缺失纯合子基因组DNA作为相应对照物；

（2）采用GSTM1基因特异性的引物SEQ1和SEQ2扩增GSTM1基因片段，同时在GSTM1基因特异性的引物界定的扩增区域内设计GSTM1基因特异性TAQman探针SEQ3-Fam；若存在GSTM1基因，则GSTM1基因特异性TAQman探针SEQ3-Fam释放FAM荧光信号而被定量PCR仪器检到；若没有GSTM1片段，则无GSTM1扩增，无FAM荧光信号释放；

（3）采用ALbumin特异性的PCR引物SEQ4和SEQ5扩增ALbumin基因片段，同时在ALbumin基因特异性的引物界定的扩增区域内设计ALbumin基因特异性TAQman探针SEQ6-Vic；若存在合格样本，则有ALbumin扩增，释放Vic荧光信号，定量PCR仪器检测到Vic荧光信号；若样本不合格，则样本无ALbumin扩增，无Vic荧光信号释放；

（4）对比扩增FAM/VIC信号确认待检测样本基因型；

所述引物SEQ1的核苷酸序列号如下：5´-CCTGGCTGTCTAAACAGTCCT-3´；

所述引物SEQ2的核苷酸序列号如下：5´-CACTCACTGTGCCTGCTCAT-3´；

所述GSTM1基因特异性TAQman探针SEQ3-Fam的核苷酸序列号如下：

Fam-5´-TGCTGCCCATCCCTGCCCTCACAACCA-3´；

所述引物SEQ4的核苷酸序列号如下：5´-ACTCCAAACCTGATGCTTCT-3´；

所述引物SEQ5的核苷酸序列号如下：5´-CCTTAGGGCAGAATTATCCA-3´；

所述ALbumin基因特异性TAQman探针SEQ6-Vic的核苷酸序列号如下：

FAM-5´-CAGCCTGTTGCCCCTTTTAGAGTTCCTTTT-3´。

2.根据权利要求1所述的基于定量PCR技术的GSTM1分型检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中人GSTM1正常纯合子、杂合子和缺失纯合子基因组DNA的浓度为10ng/μl。