[发明专利]一种小麦根尖染色体制片的方法

权利要求书

1.一种小麦根尖染色体制片的方法，其特征在于包含以下步骤：

1)种子发根；

2)预处理：待根长为1.8-3cm时，向培养皿中加入20μmol/LAPM溶液至浸没根，置于25℃培养箱生长预处理2小时；

3)笑气处理：将预处理的根尖,在装有蒸馏水的培养皿中清洗，用剪刀剪根，在室温条件下，用压强为1MPa的笑气处理1-2小时；

4)固定：向用笑气处理完之后的根加入4℃预冷的90％的冰醋酸，固定5-10min；

5)制片：先取出根尖，在45％醋酸中解离片刻，先切掉根冠，然后切取根尖生长点置于载玻片上，滴一滴45％醋酸解离细胞，盖上盖玻片后轻轻敲击使细胞分散，在酒精灯外焰轻微烘一下后直接压片。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1)种子发根的方法为：将种子放置于垫有湿润滤纸的培养皿中于25℃恒温箱中发芽，种子露白后，将培养皿中多余的水分倒掉，仅保持滤纸湿润，移至4℃冰箱中处理20-24h，然后再将培养皿移至25℃培养箱中避光生长至1.8-3cm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2)中20μmol/L APM溶液的配制方法为：向1000ml蒸馏水中加入100μl的0.2mol/L APM母液，配成20μmol/L的工作液；所述的0.2mol/L APM母液的配制方法为：60.86mg APM溶于10ml预冷的丙酮中,放入-20℃保存。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3)所述的笑气处理的方法为：将预处理的根尖，在装有蒸馏水的培养皿中清洗2次，每次4-5分钟，用剪刀剪根，将根放入带孔的eppendorf离心管中，离心管中预先加入适量的去离子水以保持湿润，在室温条件下，用压强为1MPa的笑气处理1-2小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤4)所述的固定的方法为：把用笑气处理完之后的盛有根的eppendorf离心管置于碎冰上，向离心管中加入4℃预冷的90％的冰醋酸，固定5-10min。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于包含如下步骤：

1)种子发根：将种子放置于垫有湿润滤纸的培养皿中于25℃恒温箱中发芽，种子露白后，将培养皿中多余的水分倒掉，仅保持滤纸湿润，移至4℃冰箱中处理24h，然后再将培养皿移至25℃培养箱中避光生长；

2)预处理：待根长1.8-3cm时，向培养皿中加入20μmol/L APM溶液至浸没根，置于25℃培养箱生长预处理2小时；

3)笑气处理：将预处理的根尖，在装有蒸馏水的培养皿中清洗2次，每次5分钟，用剪刀剪根，将根放入带孔的eppendorf离心管中，离心管中预先加入适量的去离子水以保持湿润，在室温条件下，用压强为1MPa的笑气处理1-2小时；

4)固定：把用笑气处理完之后的盛有根的eppendorf离心管置于碎冰上，向离心管中加入4℃预冷的90％的冰醋酸，固定5-10min；

5)制片：先取出根尖，在45％醋酸中解离片刻，用刀片先切掉根冠，然后切取根尖生长点置于载玻片上，滴一滴45％醋酸解离细胞，盖上盖玻片后轻轻敲击使细胞分散，在酒精灯外焰轻微烘一下后直接压片。