[发明专利]一种检测异性孪生母牛SRY相对含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物生物技术领域，具体涉及一种检测异性孪生母牛SRY相对含量的方法。

背景技术

母牛繁殖机理的深入研究和胚胎生物技术的快速发展使得人工诱导母牛双胎得以成为现实。双胎中若为异性孪生则公母犊的繁殖力都将受到影响，尤其以母犊受影响最大，有近85％的母犊不具备生育能力。虽然其中仍有15％左右的母犊是可育的，但在实践生产中，由于缺乏有效的早期鉴别方法，这些可育的母犊常被当做公犊处理或者饲养。

常规PCR技术能对核酸分子进行特异性的定性检测。实时荧光定量PCR技术在反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累可实现PCR扩增过程中的实时监控和连续性分析，检测灵敏度和准确性都比常规PCR技术要高。

SRY基因是Y染色体上决定哺乳动物雄性性别的重要基因片段，在系统进化中具有高度的保守性。SRY基因在人类医学中主要用于检测性别发育异常患者的染色体组成，分析可能的患病原因，为科学治疗疾病提供依据；在动物生产上主要应用在奶牛胚胎性别鉴定和性别控制上。

目前认为，异性孪生母牛不育是由于发育较早的雄性胎儿产生的激素及XY细胞通过共用的尿囊膜之间的血管吻合支影响了雌性胎儿的生殖系统发育。因此，异性孪生不育母牛体内存在XX/XY嵌合体，检测XX/XY嵌合体的存在为鉴别异性孪生母牛是否可育提供了一个可能的途径。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测异性孪生母牛SRY相对含量的方法。

本发明首先保护引物对I，由引物SRY-F和引物SRY-R组成；

所述引物SRY-F为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物SRY-R为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代且与序列2具有相同功能的DNA分子。

本发明还保护引物组合，由所述引物对I和引物对II组成；

所述引物对II由引物GAPDH-F和引物GAPDH-R组成；

所述引物GAPDH-F为如下(b1)或(b2)：

(b1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(b2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物GAPDH-R为如下(b3)或(b4)：

(b3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(b4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代且与序列4具有相同功能的DNA分子。

本发明还保护所述引物对I或所述引物组合的应用，为如下(c1)-(c6)任一种：

(c1)检测SRY相对含量；

(c2)制备用于检测SRY相对含量的试剂盒；

(c3)检测异性孪生母牛SRY相对含量；

(c4)制备用于检测异性孪生母牛SRY相对含量的试剂盒；

(c5)鉴别异性孪生母牛是否可育；

(c6)制备用于鉴别异性孪生母牛是否可育的试剂盒。

本发明还保护含有所述引物对I或所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)：

(d1)检测SRY相对含量；

(d2)检测异性孪生母牛SRY相对含量；

(d3)鉴别异性孪生母牛是否可育。

所述试剂盒还包括2×SYBR Green Master(Rox)和超纯去离子水。

所述2×SYBR Green Master具体可为购买自Roche的货号为04 913 850 001的产品。

所述超纯去离子水为不含DNA和RNA降解酶的无菌水(DNase/RNase-Free water)。

所述含有所述引物组合的试剂盒组分具体可如表4所示。所述目标引物SRY由引物SRY-F和引物SRY-R组成。引物SRY-F和引物SRY-R的浓度均为10μM。所述内参引物GAPDH由引物GAPDH-F和引物GAPDH-R组成。引物GAPDH-F和引物GAPDH-R的浓度均为10μM。

本发明还保护以上任一所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。