[发明专利]抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法

权利要求书

1.一种抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法，其特征在于，所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法通过蛋白质工程的手段将报告基因的编码核酸序列直接与抗原编码核酸的序列融合后以重组表达的方式获得报告基因或酶融合抗原；直接使用表达酶融合抗原的真核或原核细胞裂解物作为检测用重组抗原；使用抗体捕获蛋白包被吸附于固相表面。

2.如权利要求1所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法，其特征在于，所述抗体捕获蛋白包括：链球菌蛋白A，蛋白G，重组蛋白A/G，蛋白L或以抗体作为免疫原刺激动物产生针对抗体的普通二抗。

3.如权利要求1所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法，其特征在于，所述抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法包括以下步骤：

步骤一，使用抗体捕获蛋白包被检测板的固象表面；

步骤二，使用抗体捕获蛋白吸附与载体固相表面后，使用无关蛋白进行封闭，将检测板固相表面上未吸附抗体捕获蛋白的表面进行封闭；

步骤三，将报告基因的核酸序列与抗原或抗原表位编码基因的核酸序列通过分子克隆的方式连接为一个单一的核酸序列，使报告基因和抗原表达为一个单一的融合重组蛋白作为检测用抗原使用；

步骤四，将表达报告基因融合重组抗原的细胞使用适当的方法破碎裂解，部分原核细胞难以表达的蛋白可使用真核细胞表达系统进行表达；

步骤五，将待检测样本以1:20的比例加入含有重组抗原的裂解液中混合后，加入抗体捕获蛋白包被，无关蛋白封闭的检测板的孔中进行孵育；

步骤六，样本中所有抗体首先被抗体捕获蛋白所捕获吸附与检测板的固象表面，吸附于固相表面的抗体中若含有可识别重组酶融合抗原的抗体，则可捕获细胞裂解液中携带报告基因的重组酶融合抗原；

步骤七，通过洗涤法去除液相中未被抗体识别的重组酶融合抗原及细胞裂解物，加入酶融合抗原上的报告基因所识别的底物进行反应，通过检测报告基因的活性，确认样本中是否含有针对重组蛋白的抗体。

4.如权利要求3所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法，其特征在于，所述步骤二中无关蛋白包括：牛血清蛋白，鸡卵清蛋白，冷水鱼皮明胶或脱脂牛奶。

5.如权利要求3所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法，其特征在于，所述步骤七中底物包括：荧光素酶底物或辣根过氧化物酶底物。

6.如权利要求1所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法，其特征在于，所述抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法还包括：使用琼脂糖微球或者磁珠微球作为固象的表面，以化学法偶联的方式来结合抗体捕获蛋白，以抗体捕获蛋白偶联微球和抗体反应将抗体吸附于微球的表面，通过离心或者磁力吸附的方式来分离包含有抗体的微球。

7.一种由权利要求1～6任意一项所述抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法制备的抗体检测试剂盒。