[发明专利]利用单拷贝核基因检测食品和饲料中绵羊源性成分的实时荧光PCR检测方法

权利要求书

1.一种利用单拷贝核基因检测食品和饲料中绵羊源性成分的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；

第二步，检测扩增产物的荧光信号；

第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有绵羊源性成分以及定量检测样品中的绵羊源性成分的含量；

其中，用于PCR扩增的反应体系中含有扩增绵羊源性成分的特异性引物对和绵羊源性成分的特异性探针，所述扩增绵羊源性成分的特异性引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示，所述绵羊源性成分的特异性探针的序列如SEQ ID NO.3所示；

所述PCR扩增的条件如下：

反应体系为25μL：2×实时荧光PCR试剂12.5μL，引物各10μM，探针5μM，DNA模板5μL；其中，所述实时荧光PCR试剂为TaqMan Mastermix；

PCR反应条件：95℃10min；95℃15s，60℃1min；共45个循环。

2.一种绵羊源性成分的检测试剂盒，其特征在于，含有以下试剂：

(a)扩增绵羊源性成分的特异性引物对；

(b)绵羊源性成分的特异性探针；

其中，所述扩增绵羊源性成分的特异性引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述绵羊源性成分的特异性探针的序列如SEQ ID NO.3所示；

所述PCR扩增的条件如下：

反应体系为25μL：2X TaqMan Mastermix 12.5μL，引物各10μM，探针5μM，DNA模板5μL；

PCR反应条件：95℃10min；95℃15s，60℃1min；共45个循环。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括：

(c)标准参照物。

4.一种如权利要求2或3所述的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于定性或定量检测食品或饲料中的绵羊源性成分。