[发明专利]识别癌胚抗原的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种识别癌胚抗原的嵌合抗原受体及其应用。本发明的抗癌胚抗原的嵌合抗原受体，由识别癌胚抗原的单链抗体(scFV)，铰链区，跨膜区和胞内信号域依次连接组成；所述识别癌胚抗原的单链抗体的氨基酸序列含有M5A‑scFV的氨基酸序列或通过对M5A‑scFV多肽进行随机点突变得到的氨基酸序列。该嵌合抗原受体识别癌胚抗原，能够更稳定的表达于T淋巴细胞，可以维持靶向CEA的嵌合抗原受体在病人细胞培养过程中的阳性率并且能够加强CAR‑T的增殖和杀伤肿瘤的能力，并且对抗原阴性的细胞无毒副作用，能够用于肿瘤的靶向治疗；且人源化程度高，可以有效地降低CAR的免疫原性，增强CAR‑T在体内的持续和安全性。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及识别癌胚抗原的嵌合抗原受体及其应用，还涉及包含识别癌胚抗原(CEA)scFV的嵌合抗原受体的慢病毒载体和应用。

背景技术

单克隆抗体抗体的产生技术经历了三个阶段：经典免疫方法产生的异源多克隆抗体；细胞工程产生的鼠源单克隆抗体及基因工程产生的人源单克隆抗体。以小鼠来源单克隆抗体用于疾病治疗，直接使用小鼠抗体进行人体治疗时，因为鼠抗的异质性会引起人抗鼠抗体反应(Human anti-mouse antibody reaction，HAMA)，导致抗体半衰期短，在循环系统中被很快清除，失去疗效。因此，治疗用鼠源单抗需要进行人源化修饰以提高抗体的人源化程度、减弱HAMA。

单链抗体(Single-chain variable fragment(scFv))是由抗体的可变区(VH和VL区)通过15-20个氨基酸的短肽连接而成，scFv能较好地保留其对抗原的亲和活性，并具有分子量小、穿透力强和抗原性弱等特点。

人源化抗体是指抗体的可变区部分(即VH和VL区)或抗体全部由人类抗体基因所编码。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应，人源化抗体的形式也从最初的嵌合抗体、改型抗体等逐步发展为人源化抗体。

将鼠源抗体改造为人源化抗体有以下几种主要形式：鼠可变区(Viarableregion，VRs)+人恒定区(Constant region，CRs)、鼠互补决定区(Complementaritydetermining region，CDRs)+人框架区(Fragment regions，FRs)、鼠CDRs+人FRs等，尤其以“鼠CDRs+人FR”模式最为常见，这种人源化抗体形式仅仅保留了CDRs中的鼠源残基，而将其余部分替换为人抗残基，能将鼠抗的异源反应降到较低水平。但是直接将鼠抗CDRs移入人抗FRs通常会导致抗体失去原有抗原结合活性，因此需要对影响抗原抗体结合的关键残基进行反复修改，而后通过大量抗原抗体结合特异性、亲和力检测，从而筛选得到具有活性的抗体序列。