[发明专利]识别癌胚抗原的嵌合抗原受体及其应用

权利要求书

1.抗癌胚抗原的嵌合抗原受体，其特征在于，由识别癌胚抗原的单链抗体(scFV)，铰链区，跨膜区和胞内信号域依次连接组成；所述识别癌胚抗原的单链抗体的氨基酸序列含有M5A-scFV的氨基酸序列或通过对M5A-scFV多肽进行随机点突变得到的氨基酸序列；所述识别癌胚抗原的单链抗体(scFV)的氨基酸序列如SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14所示或SEQID NO：15所示；所述铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示，编码所述铰链区的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；所述跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示，编码所述跨膜区的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示；编码所述胞内信号域的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：6-8所示。

2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的前导肽和单链抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.权利要求1-2任一项所述的嵌合抗原受体的慢病毒载体的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)合成含有识别癌胚抗原的单链抗体(scFV)的嵌合抗原受体的基因序列：依次合成前导肽和抗人CEA单链抗体的核苷酸序列、铰链区、跨膜区和胞内信号域的核酸序列；所述铰链区核酸序列如SEQ ID NO：5、跨膜区核酸序列如SEQ ID NO：9所示、胞内信号域核酸序列如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8；所述识别癌胚抗原的单链抗体(scFV)的氨基酸序列如SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14所示或SEQ ID NO：15所示；

2)构建表达嵌合抗原受体的慢病毒载体：设计引物，正向引物的核苷酸序列如SEQ IDNO：20所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：21所示，以所述嵌合抗原受体的序列为模板进行PCR扩增，得DNA片段；

将所述DNA片段的基因序列用限制性内切酶NheI和SalI双酶切，同时用限制性内切酶NheI和SalI酶切慢病毒表达载体pCDH-EF1，然后将酶切后的目的片段和慢病毒表达载体片段通过T4连接酶进行连接，获得表达嵌合抗原受体的慢病毒载体。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)之后，包装并纯化所述慢病毒载体。

5.权利要求3所述的制备方法所得的慢病毒载体。

6.权利要求5所述的慢病毒载体感染的T细胞。

7.权利要求6所述的T细胞在用于制备治疗实体瘤的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的实体瘤的细胞能够表达CEA。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述实体瘤为结直肠癌肿瘤。

10.如SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14所示或SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列在用于制备治疗实体瘤的药物中的应用。

11.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述的实体瘤的细胞能够表达CEA。

12.如SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14所示或SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列在在用于制备精准捕获能够表达CEA实体瘤细胞的载体中的应用。