[发明专利]辽东栎的SSR分子标记引物和鉴定辽东栎品种的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辽东栎的SSR分子标记引物和鉴定辽东栎品种的方法及其应用。

背景技术

辽东栎(Quercus liaotungensis Koidz)是壳斗科栎属的植物，落叶乔木，高达15m；喜光、耐干旱瘠薄和萌芽力强，多次砍伐仍能萌生成林；木材坚硬耐腐，可供建筑、枕木、家具等使用。目前，辽东栎在山西已被广泛应用于荒山造林，因此，选取优良品种的辽东栎进行育苗具有重要的意义。山西省林业科学院经过多年努力，选育了表现优良的6个品种的辽东栎，但根据外观形态很难区分不同品种的辽东栎。本申请提出利用SSR分子标记来区分不同品种的辽东栎的方法，其结果具有鉴别准确、高效和可靠。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种辽东栎的SSR分子标记引物和利用该SSR分子标记引物鉴定辽东栎品种的方法及其应用。

本发明提供了一种辽东栎的SSR分子标记引物，所述引物包括ssrQrZAG 96、ssrQrZAG 7、Qden 03011及Qden 05031，各引物所对应的序列为：

ssrQrZAG 96正向：ACATCATCAACTATGCCGAACA

反向：GGTTGGGAAAAGGAGATCAGA；

ssrQrZAG 7正向：CAACTTGGTGTTCGGATCAA

反向：GTGCATTTCTTTTATAGCATTCAC；

Qden 03011正向：AACCC AACCTTCCCTTCATC

反向：GCAGTGGTGCCTAATGTAGAC；

Qden 05031正向：CCCCGATTCGCCATCATTGT

反向：GTAACGCCGTTTTTCTCCACC。

优选地，所述引物的退火温度都为58℃。

本发明还提供了一种利用SSR分子标记引物鉴定辽东栎品种的方法，该方法包括以下步骤：

提取供试辽东栎品种样品的DNA；

利用所述的SSR分子标记引物对辽东栎品种样品的DNA进行PCR扩增，其中PCR扩增反应总体积为20μL，扩增反应体系为：LA TaqDNA Polymerase(5U/μL)0.2μL、10×PCR mix 2.0μL、反向引物(10pmol/μL)0.4μL、正向引物(10pmol/μL)0.2μL、M13+正向引物0.2μL、DNA模板(<1μg)1.0μL和ddH2O 16.0；热循环条件如下：反应先在94℃预变性5min,然后在94℃变性20s、58℃复性20s、72℃延伸20s条件下进行30轮循环，最后在72℃延伸5min，4℃保存；

将上述PCR产物进行毛细管电泳分析。

优选地，通过4对SSR分子标记引物PCR扩增后进行毛细管电泳分析，对供试辽东栎品种与已知辽东栎品种进行鉴定。

施用本发明提供的鉴定辽东栎品种的方法后，能够准确、高效和可靠鉴别不同品种的辽东栎。

附图说明

图1为6个辽东栎品种基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测图(M,DL2000marker；A-F分别表示6个品种辽东栎基因组DNA)；

图2为6个辽东栎品种ssrQrZAG 96等位基因毛细管电泳图谱(A-F依次代表6供试样本)；

图3为6个辽东栎品种Qden 05011等位基因毛细管电泳图谱(A-F依次代表6供试样本)；

图4为6个辽东栎品种Qden 05031等位基因毛细管电泳图谱(A-F依次代表6供试样本)；

图5为6个辽东栎品种ssrQrZAG 7等位基因毛细管电泳图谱(A-F依次代表6供试样本)。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

1、材料

6个品种辽东栎品种分别编号为A、B、C、D、E和F，由山西省林科院提供，待试样本叶片液氮速冻处理，保存在-76℃冰箱备用。荧光标记SSR引物由睿博兴科生物技术有限公司合成，引物序列信息如下表1：

表1.用于不同品种辽东栎SSR分析的PCR引物

2、方法

2.1基因组DNA的提取