[发明专利]α-吡喃酮phomone D及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及α-吡喃酮phomone D及其制备方法和应用。

背景技术

植物内生菌具有独特的生存环境与生存方式，使其能够产生结构多样的活性物质，且部分植物内生菌能够产生于寄主植物结构完全不同的新颖天然化合物，因而作为药物先导化合物的重要来源逐步受到人们的广泛关注。本发明所得结构新颖的α-吡喃酮类成分来自缅桐的植物内生菌。缅桐为产自印度东部，缅甸，我国云南等地的灌木或者乔木植物。所得化合物phomone D具有新颖的结构和很强的抗肿瘤活性，将为日益增加的肿瘤创新药物的市场需求提供一个可行的候选方案。

发明内容

本发明的目的在于提供结构新颖化合物α-吡喃酮phomone D及其制备方法和医药用途。

本发明提供了新的α-吡喃酮，其具有如下结构：

本发明还提供了所述新的α-吡喃酮phomone D的制备方法，该方法包括如下步骤：

(1)植物内生真菌Phoma sp.YN02-P-3(CGMCC:13200)的大米培养基培养30天后用溶剂提取，回收溶剂得粗提物；

(2)步骤(1)所得粗提物经水扩散后，使用乙酸乙酯进行萃取得到乙酸乙酯层浸膏；

(3)步骤(2)所得粗提物经硅胶柱色谱法分离，以洗脱溶剂石油醚和乙酸乙酯混合溶剂，或石油醚和丙酮混合溶剂梯度洗脱；

(4)上述步骤(3)中所得馏分经过重结晶得到phomone D。

本发明提供的所述新的phomone D的制备方法中，

步骤(1)中的培养方法为静置培养；

所述溶剂为：95％乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮中的一种；溶剂体积为植物内生真菌Phoma sp.YN02-P-3的大米培养基重量的2-5倍。

所述大米培养基组成为：大米：水的重量体积比为80:100～80:120。

本发明提供的所述新的phomone D的制备方法中，

步骤(3)中所述石油醚和乙酸乙酯混合溶剂，或石油醚和丙酮混合溶剂，混合溶剂的比例为100：1～1：1。

步骤(4)中所述的馏分为石油醚：丙酮＝100:10～100：30洗脱得到的馏分。

步骤(4)中重结晶溶剂为：甲醇。

本发明以体外抗肿瘤实验模型，采用HL-60、PC3、HCT116细胞模型考察phomone D对三种肿瘤细胞生长抑制作用情况，结果显示phomone D 能够有效地三种肿瘤细胞的生长，且具有较低的用药剂量。

因此，本发明中制备的新化合物phomone D可在开发抗肿瘤疾病药物方面应用。

本发明使用的YN02-P-3菌株已送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏。保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。保藏日期2016年12月21日，保藏编号为CGMCC No.13200，分类命名为茎点霉(Phoma sp.)

附图说明

图1本发明phomone D的¹H NMR谱；

图2本发明phomone D的¹³C NMR谱；

图3本发明phomone D的HSQC谱；

图4本发明phomone D的HMBC谱。

具体实施方式

下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。

实施例1

(1)植物内生真菌Phoma sp.YN02-P-3的大米培养基室温静置培养 30天后用甲醇溶剂提取，回收甲醇提取液得粗提物；

(2)步骤(1)所得粗提物经水扩散后，使用乙酸乙酯进行萃取得到乙酸乙酯层浸膏100.0g，

(3)上述步骤(2)中所得的乙酯层浸膏100g，经石油醚：丙酮100:1～ 100:100梯度洗脱，收集石油醚：丙酮100:10～100:30部分，回收溶剂的浸膏5.2g；

(4)上述(3)中所得5.2g浸膏，取出100mg经石油醚/乙酸乙酯＝1:1 混合液体溶解，静置析出结晶后取出溶剂。结晶用二氯甲烷溶解后回收溶解得phomone D 10mg。

(5)上述(4)中所得phomone D经高效液相色谱分析，85％甲醇水系统洗脱，phomone D色谱峰面积占总色谱峰面积为91％。

根据phomone D的理化性质和波谱数据鉴定了其结构(phomone D的核磁谱图见附图1-4)。