[发明专利]一种A群奈瑟氏脑膜炎球菌的非动物源培养基及其培养方法

说明书

本发明公开了一种A群奈瑟氏脑膜炎球菌的非动物源培养基，它包括液体培养基和固体培养基，其中，液体培养基成分：非动物源有机氮源8～30g/L、氯化钾0.2～0.8g/L、味精1～2g/L、氯化铵1.5～3g/L、磷酸氢二钠0.5～0.8g/L、磷酸二氢钠0.15～0.3g/L、胱氨酸0.01～0.03g/L、硫酸镁0.3～0.5g/L、葡萄糖6～8g/L；固体培养基在前述液体培养基的基础上添加10～20g/L的琼脂。本发明还公开了前述培养基的制备方法和用途。本发明培养基可以高效培养A群奈瑟氏脑膜炎球菌，获得的多糖含量高，并且培养基为非动物源培养基，安全性好，应用前景优良。

技术领域

本发明涉及一种A群奈瑟氏脑膜炎球菌的非动物源培养基及其培养方法。

背景技术

脑膜炎球菌性脑膜炎(meningococcal meningitis)又称流行性脑脊髓膜炎(Neisseria meningitides，NM)，简称流脑，是由奈瑟氏脑膜炎球菌引起的一种严重危害人类健康的呼吸道传染病。易感人群主要为婴幼儿，以暴发型病死率最高，可达40％－60％。根据荚膜多糖在化学和血清学上的不同，脑膜炎球菌分为若干群，其中A、C、Y、W135群是常见的致病菌。脑膜炎球菌除了引起细菌性脑膜炎外还可引起败血症，是一类危害性极大的致病菌。脑膜炎球菌荚膜多糖是其致病的主要毒力因子，因其具有较强的抗原性，已被作为保护性抗原用于流脑疫苗的制备和生产。在当今世界儿童传染病的防治目标中，流脑的免疫预防仍然是重要课题之一。

我国于1980年正式生产A群NM多糖疫苗，推广应用以来，获得满意的免疫效果。但现有的A群NM疫苗生产工艺中，采用了动物源性的发酵原料；由于动物源原材料可能带有朊病毒等致病因子的潜在风险，国际生物制品行业发展的趋势要求尽量避免使用动物源性原材料，有效降低生物制品风险。

流脑A群疫苗生产厂家一般采用将A群奈瑟氏脑膜炎球菌种开启到10％羊血巧克力琼脂培养基(含羊血成分)，再传到改良半综合培养基(含牛源酸水解酪蛋白)，最后接种到改良半综合液体培养基(含牛源酸水解酪蛋白)，这些在培养基中接入的动物血液成分和动物来源的氮源成分均存在潜在的感染动物携带病毒的风险，而且成分复杂，给疫苗带来不安全的风险。据现场观察资料，疫苗接种后的全身中强反应率为3.3％；局部中强反应率约为6％。

因此，需要对现有的A群奈瑟氏脑膜炎球菌的培养基进行改进，提供一种能够高效培养A群奈瑟氏脑膜炎球菌的无动物源性原料的培养基。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种无动物来源成分的A群奈瑟氏脑膜炎球菌培养基及其制备方法和应用。

本发明A群奈瑟氏脑膜炎球菌的非动物源培养基，它包括液体培养基和固体培养基，其中，液体培养基为每1000ml培养基含有如下成分：非动物源有机氮源8～30g、氯化钾0.2～0.8g、味精1～2g、氯化铵1.5～3g、磷酸氢二钠0.5～0.8g、磷酸二氢钠0.15～0.3g、胱氨酸0.01～0.03g、硫酸镁0.3～0.5g、葡萄糖6～8g，其余为水；

固体培养基每1000ml培养基含有如下成分：非动物源有机氮源8～30g、氯化钾0.2～0.8g、味精1～2g、氯化铵1.5～3g、磷酸氢二钠0.5～0.8g、磷酸二氢钠0.15～0.3g、胱氨酸0.01～0.03g、硫酸镁0.3～0.5g、葡萄糖6～8g，琼脂10～20g，其余为水。

其中，所述非动物源有机氮源为酵母粉、大豆蛋白胨、豌豆蛋白胨、大米蛋白胨的一种或多种的组合。

优选地，所述非动物源有机氮源为酵母粉或者大豆蛋白胨。

优选地，所述非动物源有机氮源为酵母粉和大豆蛋白胨的混合物，二者的重量比例为1:1；或者，所述非动物源有机氮源为酵母粉和大米蛋白胨的混合物，二者的重量比例为1:1。