[发明专利]一种陆地棉I式果枝的分子鉴定方法有效
| 申请号： | 201710219988.4 | 申请日： | 2017-04-06 |
| 公开（公告）号： | CN106755564B | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 秦鸿德;张友昌;冯常辉;宋成攀 | 申请（专利权）人： | 湖北省农业科学院经济作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 11465 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 王鹏 |
| 地址： | 430000 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 陆地棉 果枝 分子 鉴定 方法 | ||
1.一种陆地棉I式果枝的分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)对棉花进行DNA提取；
(2)根据与陆地棉果枝形态共分离的基因Gorai.001G121800_ATC中位于第2外显子的第17个碱基处的SNP位点设计dCAPS引物，所述dCAPS引物如下：
正向引物SEQ ID No.1：5’-TTCAACACCAACAAGCAGGT-3’；
反向引物SEQ ID No.2：5’-GGTCACTAGGACCAGGAACAA-3’；
并且以步骤(1)得到的DNA为模板进行PCR扩增；
(3)使用限制性内切酶Mun I对步骤(2)得到的产物进行酶切，37℃水浴2-4个小时；
(4)对步骤(3)得到的酶切产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，并进行染色，根据226bp处的特异性酶切条带判断共分离基因的有无，从而确定果枝类型。
2.根据权利要求1所述的一种陆地棉I式果枝的分子鉴定方法，其特征在于：所述步骤(2)中PCR扩增的反应体系为：模板1μl，10mM正向引物1μl，10mM反向引物1μl，10×PCRBuffer 1μl，10mM dNTPs 0.2μl，25mM MgCl2 1μl，2U/μl TaqDNA聚合酶0.1μl和ddH2O4.7μl。
3.根据权利要求1所述的一种陆地棉I式果枝的分子鉴定方法，其特征在于：所述步骤(2)中PCR扩增的循环程序为：95℃预变性3min，95℃变性45s，58℃退火45s，72℃延伸60s，30个循环；72℃延伸5min，4℃保存。
4.根据权利要求1所述的一种陆地棉I式果枝的分子鉴定方法，其特征在于：所述步骤(3)中酶切反应体系为：Mun I 1μl、10×M Buffer 2μl、0.1％BSA2μl、DNA3μl、灭菌水2μl。
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