[发明专利]绿边芫菁中斑蝥素的测定方法

说明书

本发明公开了一种斑蝥素的测定方法，包括：前处理：绿边芫菁真空干燥，粉碎，过筛；提取：取过筛后的粉末置具塞锥形瓶中，加入丙酮，进行超声波提取数次，以将斑蝥素充分提取出来，合并提取液，过滤，获得粗提液；纯化：粗提液经过碱性处理，使油脂同碱反应生成易溶于水的盐，再进行除水处理，得到无油脂和无水的纯化液；浓缩：将纯化液蒸干进行浓缩，残渣中加入乙腈，摇匀后用针筒过滤器过滤，获得滤液；检测：使用高效液相色谱检测滤液中斑蝥素的含量。本发明不仅提高了斑蝥素的提取率，缩短了斑蝥素的提取时间，经过去除油脂和脱水后，使斑蝥素的测量含量与真实含量的偏差缩小了13％以上，使得测定结果具有较高的精确度和良好的稳定性。

技术领域

本发明涉及一种中药单体化合物的测定方法，特别是涉及绿边芫菁中斑蝥素的测定方法。

背景技术

斑蝥素(cantharidin)即斑蝥酸酐，一种昆虫分泌的倍半萜类剧毒物质，常用于育发、利尿和治疗癌症等，并取得较好的效果。我国是世界上最早认识斑蝥素药用价值的国家。早期斑蝥素的测定方法有重量法和酸碱滴定法，但这两种方法检测结果不够准确，很快就被淘汰。2000年中国药典规定了用薄层扫描法和紫外分光光度法测定斑蝥素，但这两个方法操作复杂而且测定结果也不是非常准确。近年来，气相色谱法和高效液相色谱法逐渐成为斑蝥素的主流检测方法。高效液相色谱法是以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术，与气相色谱相比，具有分离效能高、分析速度快及更简便易行等优点，但目前采用内高效液相色谱法检测斑蝥素时，提取步骤繁琐耗时，提取液没经过纯化处理，干扰物质多，导致信噪比低，检测结果不够准确等缺点。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供后面将说明的优点。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种操作简单，分析速度快，分离效能高的斑蝥素的测定方法，其包括以下步骤：

1)前处理：绿边芫菁真空干燥，粉碎，过筛；

2)提取：取过筛后的粉末置具塞锥形瓶中，加入丙酮，进行超声波提取获得提取液，合并提取液，过滤，获得粗提液；

3)纯化：粗提液经过碱性处理，使油脂及有机酸同碱反应生成易溶于水的盐，再进行除水处理，得到无油脂和无水的纯化液；

4)浓缩：将纯化液蒸干进行浓缩，残渣中加入乙腈，摇匀后用针筒过滤器过滤，获得滤液；

5)检测：使用高效液相色谱检测滤液中斑蝥素的含量。

优选的是，步骤1)中，绿边芫菁的干燥温度为50～65℃，真空度为-0.06～0.09Mpa，干燥时间1～2h，干燥时间缩短了3～5h，绿边芫菁的粉碎方式为研磨或粉碎机。

优选的是，步骤2)中，称取粉末质量为0.5～2g，加入有机溶剂丙酮体积为10～40ml，超声波提取2～4次，超声波的频率为30～40kHz，每次30～70min，以使充分提取粉末中的斑蝥素。

优选的是，步骤3)中，碱性处理为将粗提液通过无水碳酸钠柱子，除水处理为碱性处理后的溶液通过无水硫酸钠柱子。

优选的是，步骤4)中所述蒸干的方式为使用旋转蒸发仪进行蒸干，转速为50～100r/min，温度为50～65℃，所述残渣加入乙腈体积为1～4ml。

优选的是，步骤5)中高效液相色谱的条件为：采用250mm×4.6mm×5.0μm的C18色谱柱，检测波长为230mm，流速为0.8～1.2mL/min，柱温为30～35℃，进样量10～20μL，检测灵敏度1AUFS，流动相为甲醇：水＝(22～25)：(78～75)。