[发明专利]抗B型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体、其用途以及分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞

说明书

本发明涉及抗B型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体、其用途以及分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞。本发明还涉及所述单克隆抗体用于制备检测样品中B型肝炎病毒核心抗体的试剂的用途，包含所述单克隆抗体的检测试纸条。本发明的单克隆抗体特异性强、灵敏度高、稳定性好，可用于快速、准确地检验样品中的B型肝炎病毒核心抗体。

技术领域

本发明涉及抗B型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体，分泌所述单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及所述单克隆抗体在B型肝炎病毒核心抗体检测中的用途。

背景技术

B型肝炎病毒(Hepatitis virus B，HBV)属DNA病毒，是一种嗜肝病毒，为有包膜的部分双链环状DNA病毒。B型病毒性肝炎的传染方式主要通过输血、注射和母婴传播。B型肝炎病毒(HBV)感染是世界性的难题，全球范围内慢性感染者多达4亿，发展中国家是B型肝炎的重灾区。B型肝炎通常会造成慢性感染，可进展为肝硬化乃至肝细胞癌，对人类健康有巨大的威胁。

共价闭合环状脱氧核糖核酸(covalenfly closed circular DNA即 cccDNA)是B型肝炎病毒(HBV)复制中的重要环节，是mRNA和前基因组 RNA的合成模板，也是HBV难以治愈的关键因素，其长期存在与B型肝炎的慢性化以及抗病毒治疗后复发有着重要关系。故做好cccDNA的检测工作对于了解患者病情变化、评估治疗效果有着十分重要的意义。但肝组织内cccDNA的检测需要做肝组织活检，患者往往难以接受，所以寻找一种操作方便，灵敏度高的血清学标志很有必要。

随着对B型肝炎病毒血清标志物研究的深入，人们认识到了检测血清中B型肝炎病毒核心抗体(Hepatitis B core Antibody即HBcAb)在HBV感染的监测及治疗中所具有的重要临床意义。乙肝核心抗体(HBcAb)是乙肝病毒核心抗原的对应抗体，它不是保护性抗体，它的存在反而是受到乙肝病毒侵害的指标之一。HBcAb的存在可作为乙肝传染性活动性病变的标志，同时有助于乙肝病情和预后的判断。

但是，现有的HBcAb检测方法主要是化学发光微粒子免疫检测法 (CMIA)、酶联免疫竞争抑制一步法(ELISA)和胶体金法。无论使用何种检测方法，其检测结果的优劣与测定中所使用的单克隆抗体的灵敏度、特异性和稳定性密切相关。因此，为了获得更好的HBcAb检测方法，寻找灵敏度、特异性与稳定性俱佳的HBcAg单克隆抗体成为人们一直追求的目标。另外，由于检测试剂、试纸条的保存条件有时并不能尽如人意，所以人们通常希望检测试剂与试纸条在经过恶劣的环境变化后还能保持高度的稳定性与可信度。

发明内容

本发明制备了特异性强、灵敏度高、稳定性好的抗B型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体，以及分泌所述抗体的杂交瘤细胞。

本发明采用经典的杂交瘤单克隆抗体技术。以四川迈克生物新材料技术有限公司自产的重组HBcAg批号(150827)免疫2只Balb/C小鼠，用血清筛选后选取抗体效价较好的小鼠用于细胞融合，融合后经有限稀释法筛选出1株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(12E4)，该细胞株以保藏号 CCTCC NO：C201747保藏于中国典型培养物保藏中心。发明人继而制备纯化后的抗体，经间接ELISA检测其效价，使用上海科华生物工程股份有限公司B型肝炎病毒核心抗体检测试剂盒检测活性，并制备成检测试剂盒检测临床样本，经过反复冻融及热加速处理后继续制备成检测试剂盒检测临床样本，证实了我们制备的可分泌抗B型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体能与目的蛋白发生特异性的结合，该高效价、高灵敏度、高特异性、高稳定性的单克隆抗体能在胶体金平台(竞争抑制法)准确快速地检测血清中HBcAb。

附图说明

图1展示了本发明的单克隆抗体A与两种商业化抗B型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体B与C的抗体效价检测的结果。以LOG(稀释度)作为横坐标，抗体OD值作为纵坐标。