[发明专利]一株高效转化甘草酸生产GAMG的东乡野生稻内生真菌及其应用

权利要求书

1.球毛壳菌Chaetomium globosum DX-THS3在生产GAMG中的应用，其中，所述球毛壳菌Chaetomium globosum DX-THS3已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2016年1月4日，保藏号为CCTCC NO:M 2016005。

2.如权利要求1所述的应用，其特征是，包括以下步骤：

1)将球毛壳菌Chaetomium globosum DX-THS3接种到PDA斜面培养基上进行活化培养5~7天，然后用接种环挑取一环菌种接入到已灭菌的种子培养基中，置于温度为28~30℃、转速为120~160r/min的摇床中，连续培养3~5天，即至菌体的对数生长期；

2)按照1~10％ w/v的接种量把上述培养好的种子接种至含甘草酸盐或甘草粗提物的转化培养基中，转化生产GAMG至含量恒定；

3)从发酵液中分离纯化GAMG；

其中，转化培养基的成分及配比为：甘草酸盐或甘草粗提物1.0~5.0g/L，KH₂PO₄ 1.2~3.2g/L，蛋白胨2.0~5.0g/L，NaCl 0.5~1.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.25~0.5g/L，CaCl₂ 0.011~0.11g/L，ZnSO₄·7H₂O 2.87mg/L，MnSO₄·H₂O 1.69mg/L，H₃BO₃ 0.03mg/L，纯水1000mL，调节pH5.0~6.0，121℃高压蒸汽下灭菌30min；其中甘草酸盐或甘草粗提物是菌体产β-D-葡萄糖醛酸苷酶的诱导剂。

3.如权利要求2所述的应用，其特征是，在步骤1)中种子培养基的成分及配比为：葡萄糖5.0~20.0g/L，KH₂PO₄ 1.2~3.2g/L，NH₄NO₃ 2.0~5.0g/L，NaCl 0.5~1.0g/L，酵母粉0.05~0.3g/L，MgSO₄·7H₂O 0.25~0.5g/L，CaCl₂ 0.011~0.11g/L，ZnSO₄·7H₂O 2.87mg/L，MnSO₄·H₂O 1.69mg/L，H₃BO₃ 0.03mg/L，纯水1000mL，调节pH5.0~6.0，121℃高压蒸汽下灭菌30min。

4.如权利要求2所述的应用，其特征是，在步骤2)中培养条件为：温度28~36℃、转速120~180r/min；在步骤2)中的甘草酸盐为甘草酸、甘草酸铵盐、甘草酸钠盐或甘草酸钾盐；甘草粗提物为甘草水提物或甘草醇氨提物。

5.如权利要求2所述的应用，其特征是，在步骤3)中GAMG的分离纯化，包含以下步骤：布氏漏斗抽滤，收集发酵液，用石油醚等体积萃取2次，每次2小时，水相用氯仿等体积萃取两次，每次2小时，水相继续用乙酸乙酯等体积的萃取两次，每次2小时；得到的乙酸乙酯相减压浓缩即为GAMG粗品，然后再用中压柱层析或制备液相方法进一步分离纯化得到GAMG。