[发明专利]一种冻存保护液及其应用

权利要求书

1.一种冻存保护液，其特征在于：在基础培养基加入胎牛血清、人血清白蛋白、二甲亚砜、乙二醇、甲酰胺和海藻糖；各组分的用量为：

二甲亚砜 2.5～3.5mol/L

乙二醇 2.5～3.5mol/L

甲酰胺 2.0～3.0mol/L

海藻糖 0.5～1.0mol/L

胎牛血清 15～25%（v/v）

人血清白蛋白 0.2%-3%。

2.根据权利要求1所述的冻存保护液，其特征在于：各组分的用量为：

二甲亚砜3.2 mol/L

乙二醇3.2 mol/L

甲酰胺2.5 mol/L

海藻糖0.5 mol/L

胎牛血清20%（v/v）

人血清白蛋白1% 。

3.如权利要求1或者2所述的冻存保护液，其特征是：所述基础培养基为RPMI 1640 培养液。

4.一种冻存免疫细胞和脐血的方法，其特征在于：包括步骤：

A）制备冻存保护液；

B）制备细胞；

C）用步骤A）制备的冻存保护液悬浮细胞并注入冻存管；

D）直接放入液氮中进行玻璃化冻存。

5.根据权利要求4所述的冻存免疫细胞和脐血的方法，其特征在于：步骤A）中制备培养液的方法为：在基础培养基RPMI 1640 培养液中依次加入胎牛血清、人血清白蛋白、海藻糖、乙二醇、甲酰胺，过滤除菌，加入二甲亚砜，放入低温保存；各组分的用量为：

二甲亚砜 2.5～3.5mol/L

乙二醇 2.5～3.5mol/L

甲酰胺 2.0～3.0mol/L

海藻糖 0.5～1.0mol/L

胎牛血清 15～25%（v/v）

人血清白蛋白 0.2%-3%。

6.根据权利要求5所述的冻存免疫细胞和脐血的方法，其特征在于：各组分的优化用量为：

二甲亚砜3.2 mol/L

乙二醇3.2 mol/L

甲酰胺2.5 mol/L

海藻糖0.5 mol/L

胎牛血清20%（v/v）

人血清白蛋白1% 。

7.根据权利要求4所述的冻存免疫细胞和脐血的方法，其特征在于：步骤B）中制备细胞，为免疫细胞和脐血细胞两种，分别来源于人的外周静脉血和脐血，通过密度梯度离心去除红细胞，获得白膜层细胞，洗涤并用无血清培养液重悬，收集细胞。

8.根据权利要求4所述的冻存免疫细胞和脐血的方法，其特征在于：步骤C）中将用步骤B）制备的细胞进行离心，用步骤A）制备的冻存保护液悬浮细胞并调整密度至0.5～10×10⁶/ml，注入冻存管，并密封；对其进行编号，迅速放入液氮罐中进行玻璃化冷冻。