[发明专利]一株杂交瘤细胞株AB1及其产生的2;4;5-三氯苯氧乙酸单克隆抗体

说明书

一株杂交瘤细胞株AB1及其产生的2,4,5‑三氯苯氧乙酸单克隆抗体，属于食品安全检测技术领域。本发明一株2,4,5‑三氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株AB1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.13083。此细胞株分泌的单克隆抗体，对2,4,5‑三氯苯氧乙酸具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为4.4 ng/mL），可实现对农产品中2,4,5‑三氯苯氧乙酸残留量的分析检测，为食品中2,4,5‑三氯苯氧乙酸残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株杂交瘤细胞株AB1及其产生的2,4,5-三氯苯氧乙酸单克隆抗体，属于食品安全检测技术领域。

背景技术

2,4,5-三氯苯氧乙酸，也称2,4,5-涕或2,4,5-T，可用作植物的生长调节剂、除草剂。纯品为白色无臭晶体，难溶于水，对人体有一定危害。根据不同植物施用适当计量，可以防止植物落花落果，但用量不当会使植物受到严重伤害。 2,4,5-三氯苯氧乙酸具有一定的毒性，对小鼠的LD50是389mg/kg，而大鼠是500 mg/kg。

目前关于2,4,5-T的检测方法还未有报道。而酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，且检测时对样本的纯度要求不高，操作简便，可实现对大量样本的现场快速检测。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆单体是重要前提。

发明内容

本发明的目的是提供一株2,4,5-三氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株，由该细胞株制备的抗体对2,4,5-三氯苯氧乙酸具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立2,4,5-三氯苯氧乙酸的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株2,4,5-三氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株AB1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCCNo.13083。

2,4,5-三氯苯氧乙酸单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.13083的2,4,5-三氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株AB1分泌产生。

所述2,4,5-三氯苯氧乙酸单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中2,4,5-三氯苯氧乙酸残留的分析检测。

本发明提供的2,4,5-三氯苯氧乙酸单克隆抗体杂交瘤细胞株AB1的制备基本步骤为：

（1）半抗原：

Mol. Wt: 253.93

2,4,5-三氯苯氧乙酸（2,4,5-T）原药中含活泼基团（-COOH），即将其作为半抗原。

（2）完全抗原的制备：称取2.5mg 2,4,5-T（2,4,5-T与牛血清白蛋白BSA摩尔比为60︰1），3mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），溶解于300μL无水N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，室温搅拌反应10min；再称取3mg N,N'-二环己基碳二亚胺（DCC），用100μL无水DMF充分溶解后，加入到2,4,5-T溶液中，室温搅拌反应6-8h（称为A液）。取10mg BSA，用2mL 0.01M磷酸盐缓冲溶液（PBS, pH=7.0）溶解（称为B液），再逐滴将A液缓慢加入到B液中，室温反应过夜；然后用0.01M PBS溶液透析，除去未反应的小分子半抗原，得到完全抗原2,4,5-T-DCC-BSA，并通过紫外吸收扫描方法进行鉴定，计算得偶联率为25；