[发明专利]一种高分辨率测定灵芝孢子油中反式脂肪酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及油脂中反式脂肪酸的测定领域，尤其涉及一种高分辨率测定灵芝孢子油中反式脂肪酸的方法。

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)，是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的总称，灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出的极其细小的孢子，为灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物质。

灵芝孢子油为灵芝孢子粉经干燥、破壁、超临界二氧化碳萃取制得，为黄色透明液体，主要成分是灵芝三萜、不饱和脂肪酸等，药理实验研究也表明灵芝孢子油具有抗肿瘤、提高免疫、保肝护肝、抗氧化等作用。目前CFDA官网数据显示灵芝孢子油国产保健食品批文为48个，主要功效成分为灵芝三萜类，主要保健功能是增强免疫力、化学性肝损伤有辅助保护功能等。

灵芝孢子油中不饱和脂肪酸含量较高，但是不饱和脂肪酸容易发生氧化酸败，尤其是经过精制、罐装胶囊、贮存等期间更容易发生氧化反应，导致反式脂肪酸含量、酸值、过氧化值升高，不仅会影响灵芝孢子油的功效，而且反式脂肪酸会引起胆固醇增高，从而增加心血管疾病发生的风险。

目前食品中反式脂肪酸测定的标准方法主要为GB 5009.257-2016、GB 5413.36-2010和SN/T 2326-2009，但是气相色谱法测定反式脂肪酸时，脂肪酸皂化、甲酯化等样品处理过程较复杂，同时这三种方法均存在检出限较高、不能准确测定食品中反式脂肪酸含量水平，而难以广泛应用。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，提供一种高分辨率测定灵芝孢子油中反式脂肪酸的方法，具有甲酯化处理相对简单、检出限较低、灵敏度高等优点，能有效解决现有技术不足的问题。

本发明通过以下技术方案实现该目的：

一种高分辨率测定灵芝孢子油中反式脂肪酸的方法，包括如下步骤：

S1、甲酯化：称取0.100g灵芝孢子油，加入3ml正己烷，再加入3ml的0.10～0.4mol/L的氢氧化钾甲醇溶液，在50℃的温度下震荡15min，静止30min后，过膜得到样品；

S2、气相色谱检测：选用HP-88色谱柱，载气为氮气；进样口温度220～250℃，压力35.57PSI，分流比100:1；检测器温度230～260℃，氢气流量35～50mL/min，空气350～500mL/min，氮气25mL/min；

柱温箱温度为程序升温，140℃保留5min，以3～10℃/min的速度升温到210℃，保留15min，再以2～5℃/min的速度升到230℃，保留20min；进样量：1μL。

其中，所述步骤S1中的膜是设置有微孔的有机滤膜。

作为优选的，所述微孔的孔径为0.45μm。

作为优选的，所述步骤S2中进样口温度为230℃，检测器温度为250℃，氢气流量为45ml/min，空气流量为450ml/min。

作为优选的，所述步骤S2中程序升温具体为：140℃保留5min，以5℃/min的速度升温到210℃，保留15min，再以3℃的速度升到230℃，保留20min。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)本发明高分辨率测定灵芝孢子油中反式脂肪酸的方法的甲脂化过程较简单，不需要添加具有毒性的甲醇等溶剂，环保性好，安全性高；

2)本发明高分辨率测定灵芝孢子油中反式脂肪酸的方法的检出限较低，能准确测定灵芝孢子油中方式脂肪酸含量水平；

3)本发明高分辨率测定灵芝孢子油中反式脂肪酸的方法的灵敏度较高，并操作简单能广泛推广使用。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明进行详细描述。

实施例1。

一种高分辨率测定灵芝孢子油中反式脂肪酸的方法，具体实施方式如下：

1)灵芝孢子油甲酯化步骤：精确称取0.100g灵芝孢子油，加入3ml正己烷，再加入3ml的0.1mol/L的氢氧化钾甲醇溶液。使用摇床在50℃的温度下震荡15min，静止30min后，过膜得到样品。

2)反式脂肪酸检测方法：色谱柱HP-88(100m×0.25mm×0.2μm，Agilent)；载气：氮气；进样口：温度240℃，压力35.57PSI，分流比100:1；检测器：温度260℃，氢气流量50mL/min，空气500mL/min，氮气25mL/min；

3)柱温箱温度：程序升温(140℃，保留5min，以10℃/min的速度升温到210℃，保留15min，再以2℃/min的速度升到230℃，保留20min)；进样量：1μL。