[发明专利]一种微生物谷氨酰胺转胺酶稳定性的检测方法

权利要求书

1.一种MTGase稳定性的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）MTGase溶液的制备

将MTGase溶解在缓冲液中，调节溶液pH为5.0-6.0，离心收集，得到MTGase上清液；所述MTGase为由茂源链霉菌所产的MTGase；

（2）离子交换层析

将步骤（1）制备得到的MTGase上清液进行阳离子交换层析；

（3）MTGase I2 / MTGase I1的比值确定

离子交换层析过程中，随着洗脱缓冲液的比例不断增加，洗脱得到的MTGase的pH不断增加，根据pH的变化可以分离得到MTGase的两个同分异构体MTGase I1和MTGase I2，分别根据洗脱峰计算峰积分面积，计算两个同分异构体的峰面积比值；

所述同分异构体MTGase I1对应的pH范围为5.0-6.5；所述同分异构体MTGase I2对应的pH范围为6.6-8.0；

根据MTGase I2 / MTGase I1的比值判断MTGase的稳定性， MTGase I2 / MTGase I1的比值越低，MTGase的稳定性越高。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，若MTGase的存在形式为未经处理的微生物发酵液时，先将发酵液离心，收集上清，然后溶解在缓冲液中，调节溶液pH为5.0-6.0之间，离心收集上清；或，先用预冷的无水乙醇处理发酵液，静置后，离心收集沉淀，得到MTGase的粗提物，然后再溶解在缓冲液中，调节溶液pH为5.0-6.0之间，离心收集上清。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述阳离子交换层析中采用的平衡缓冲液选自磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液，pH为5.0-6.0。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述阳离子交换层析中采用的洗脱缓冲液选自磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液，pH为8.0-9.0。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，样品MTGase上清液上样的总蛋白量为5-20mg，总酶活为100-300U。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，若MTGase I2 / MTGase I1的值低于1.5，则MTGase在pH为7.0温度为37℃条件下保存5天时，保存率大于80%；

若MTGase I2 / MTGase I1的值高于2.0，则MTGase在pH为7.0，温度为37℃条件下保存5天时，保存率小于60%；

若MTGase I2 / MTGase I1的值大于等于1.5，小于等于2.0，则MTGase在pH为7.0，温度为37℃条件下保存5天时，保存率大于等于60%，小于等于80%。