[发明专利]嗜吞噬细胞无形体蛋白APH1384的应用

说明书

本发明涉及嗜吞噬细胞无形体蛋白APH1384作为粒细胞无形体病诊断抗原的应用，该蛋白可弥补现有粒细胞无形体病诊断抗原P44漏检的缺陷，提高了粒细胞无形体病检测的灵敏度，有利于临床上快速精准地诊断粒细胞无形体病的发生。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，尤其涉及一种嗜吞噬细胞无形体蛋白APH1384的应用。

背景技术

嗜吞噬细胞无形体是一种专性细胞内寄生的以蜱虫为传播媒介的革兰氏阴性菌，能导致粒细胞无形体病，如人粒细胞无形体病和犬粒细胞无形体病的发生。美国CDC的数据显示，从2000年到2012年人粒细胞无形体病的感染例数由348例增至2389例，呈快速增长的趋势。此外，粒细胞无形体病在澳大利亚、欧洲多国、日本及韩国的人群和家畜中发生局部流行。在国内，由中国疾控中心组织的血清流行病学调查表明，我国的农业从业者中粒细胞无形体病的血清阳性率高达13.9％。与欧美粒细胞无形体病患者相比，我国无形体病患者病情更为严重，死亡率可高达8.1％。我国的病人会发展成其他严重的症状，如其中41.2％会发展成多器官衰竭。另外，据中国疾控中心调查，在犬和羊的嗜吞噬细胞无形体检测中，血清阳性率分别高达10.05％和3.82％。目前，粒细胞无形体病已在世界范围内流行，成为重要的公共卫生问题。因此加强粒细胞无形体病诊断方法的优化，对医学、公共卫生及畜牧业领域具有十分重要的现实意义。

目前，粒细胞无形体病血清学诊断方法是以嗜吞噬细胞无形体来源的特异性种属蛋白为诊断抗原，检测被感染对象血清中抗该病原菌的特异性抗体，从而判断受试者是否感染嗜吞噬细胞无形体。血清学诊断方法主要包括间接免疫荧光技术(Indirectfluorescent antibody assays,IFA)，免疫印记技术(Western Blotting和Dot Blotting,WB和DB)及酶联免疫吸附实验(ELISA)。对于人或动物大批量血清样本的检测主要使用ELISA和DB方法。

IFA方法是使用嗜吞噬细胞无形体感染的细胞制备成抗原片，对临床血清标本中抗嗜吞噬细胞无形体的特异性抗体进行检测。通过孵育标记有荧光素的二抗，在荧光显微镜下观察抗原片上的荧光强度判断血清是否为阳性。该技术是目前临床上用于检测粒细胞无形体病感染的金标准，但是操作复杂，判断结果主观，且抗原片的价格昂贵，因此不适合临床上大批量血清样本的检测。而WB，DB和ELISA检测方法以嗜吞噬细胞无形体特异性重组蛋白或蛋白抗原表位多肽为诊断抗原，检测人或动物血清样本中是否存在抗嗜吞噬细胞无形体的特异性抗体。其中，ELISA方法简单，可自动化，可以用于大量临床样本的检测。但目前，这三种血清学检测方法所使用的诊断抗原均为嗜吞噬细胞无形体外膜蛋白P44，而以P44作为单一诊断抗原的检测方法存在漏检的缺陷，其检测灵敏度为80-90％。总之，IFA法检测成本高，需要价格昂贵的抗原片，且判定结果主观，操作时间相对较长，不适合大量临床样本的检测；而WB，DB和ELISA法虽然操作简单，成本低，但目前他们均以P44作为单一诊断抗原，存在漏检的缺陷，检测灵敏度有待提高。

发明内容

为解决上述检测方法的不足，本发明的目的是提供一种嗜吞噬细胞无形体蛋白APH1384的应用，该蛋白抗原性较强，能弥补P44漏检的缺陷，可提高粒细胞无形体病检测的灵敏度，从而有利于临床上快速精准地诊断粒细胞无形体病的发生。

本发明提供了一种检测嗜吞噬细胞无形体蛋白APH1384的抗体在制备粒细胞无形体病诊断试剂中的应用。

进一步地，嗜吞噬细胞无形体蛋白APH1384的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

进一步地，嗜吞噬细胞无形体蛋白APH1384的抗原表位的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示。

借由上述方案，本发明至少具有以下优点：