[发明专利]CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元、包含该功能单元的载体及其应用

权利要求书

1.CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：包括Cpf1核酸酶蛋白表达单元和crRNA转录表达克隆单元两个结构区域；所述的Cpf1核酸酶蛋白表达单元从5’到3’方向依次为：启动子-Cpf1核酸酶编码基因-终止子；所述的crRNA转录表达克隆单元从5’到3’方向依次为：启动子-核酶A编码序列-crRNA克隆单元的编码序列-核酶B编码序列-终止子；所述的启动子为Pol II型启动子；

所述的功能单元从5’到3’方向依次为：

pZmUbi1-LbCpf1 ORF-Nos T-pZmUbi1-HH Ribozyme-crRNA cloning scaffold-HDVRibozyme-Nos T；

其中，所述pZmUbi1即玉米Ubi1启动子，LbCpf1 ORF即毛螺科菌Cpf1核酸酶蛋白编码框，Nos T即Nos终止子，HH RiboZyme即HH核酶，crRNA cloning scaffold即向导crRNA克隆单元的编码序列，HDV RiboZyme即HDV核酶。

2.如权利要求1所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：所述Cpf1核酸酶编码基因的5’端和/或3’端融合核定位信号NLS编码序列。

3.如权利要求2所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：所述的NLS为SV40 NLS、nucleoplasmin NLS、c-Myc NLS、TUS-protein NLS或EGL-13 NLS中的至少一种。

4.如权利要求3所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：

所述的LbCpf1核酸酶蛋白编码框5’端融合SV40 NLS序列，5’端SV40 NLS的氨基酸序列如Seq ID No.2所示；LbCpf1核酸酶蛋白编码框3’端融合nucleoplasmin NLS序列，3’端NLS的氨基酸序列如Seq ID No.3所示。

5.如权利要求4所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：包含核定位信号的LbCpf1核酸酶蛋白的氨基酸序列如Seq ID No.1所示的。

6.如权利要求5所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：编码包含核定位信号的LbCpf1核酸酶蛋白的核苷酸序列如Seq ID No.6中 2049～5831位所示。

7.如权利要求1所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：crRNA转录表达克隆单元的编码序列中连有BsaⅠ-ccdB-BsaⅠ序列。

8.如权利要求7所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：BsaⅠ-ccdB-BsaⅠ序列的苷酸序列如Seq ID No.6中 8231～8867位所示。

9.如权利要求1所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：所述的核酶A编码序列- crRNA克隆单元的编码序列-核酶B编码序列的核苷酸序列如Seq IDNo.6中 8166～8936位所示。

10.如权利要求1~9任一项所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元，其特征在于：所述的pZmUbi1-LbCpf1 ORF-Nos T-pZmUbi1-HH Ribozyme-crRNA cloningscaffold-HDV Ribozyme-Nos T功能单元的核苷酸序列如Seq ID No.6所示。

11.含有权利要求1~10任一项所述的CRISPR/Cpf1植物基因组定向修饰功能单元的载体。

12.如权利要求11所述的载体，其特征在于：所述的载体为植物转基因骨架载体。