[发明专利]一种遗传性耳聋基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种遗传性耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括5管PCR反应液，所述5管PCR反应液分别为PCR反应液A、PCR反应液B、PCR反应液C、PCR反应液D和PCR反应液E；所述5管PCR反应液均包括：MgCl₂、PCR Buffer、dNTP混合物、Taq酶和UNG酶；

所述PCR反应液A包括如下引物和探针：

引物G2F1：5'-TAGTGATTCCTGTGTTGTGTG-3'；

引物G2R1：5'-AGCCTTCGATGCGGACCTTCTG-3'；

内参引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

内参引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探针P1：5'-GTTTGTTCACACCCCCCAGGA-Z4-BHQ1

探针P2：5'-CAGCCACAATGAGGATC-3'；

探针P3：5'-TGCAGACAAAGTCGGCCT-3'；

探针P4：5'-TAGCACACGTTCTTGCAGCCTGGCTGCAG-3'；

探针P5：5'-CAGCTGCAGGGCCCATAG-3'；

探针P6：5'-CTTCTCGTCTCCGGTAGGC-Z4-3'；

探针P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

所述PCR反应液B包括如下引物和探针：

引物G2F2：5'-GACCTACACAAGCAGCATC-3'；

引物G2R2：5'-TTCAGCAGGATGCAAATTCCAGACAC-3'；

引物G3F1：5'-AGTTCCTCTTCCTCTACCTG-3'；

引物G3R1：5'-CACAGATGGTGAGTACGATGCAGACG-3'；

引物SF1：5'-AAATACCGAGTCAAGGAATG-3'；

引物SR1：5'-GCCTTGAAGGGTAAGCAACCATCTGTC-3'；

引物SF2：5'-GAACACTTTCTCGTATCCAGCAGC-3'；

引物SR2：5'-TCCATCTATATTTTACTTGTAAGTTC-3'；

引物SF3：5'-CACAGCTAAAGATTGTCCTC-3'；

引物SR3：5'-CCATCCCTGGAGCAAGAAGCAACAC-3'；

内参引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

内参引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探针P7：5'-AGGCGTTCGTTGCACTTCACCA-3'；

探针P8：5'-CTTCTTGGTAGGTCGGGCAAT-3'；

探针P9：5'-TAGCCCAATACTAACTCCCG-3'；

探针P10：5'-CCTGACTCTGCTGGTTGGAAT-Z4-3'；

探针P11：5'-GATAATAGGGAGAACTCCATTGT-3'；

探针P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

所述PCR反应液C包括如下引物和探针：

引物SF4：5'-CTGGATTGCTCACCATTGTCGTCTG-3'；

引物SR4：5'-GTACTAAGAGGAACACCACAC-3'；

引物SF5：5'-TCATCCAGTCTCTTCCTTAG-3'；

引物SR5：5'-AGCCTTCCTCTGTTGCCATTCCTC-3'；

引物SF6：5'-GAGCAATGCGGGTTCTTTGACGAC-3'；

引物SR6：5'-TCTTGAGATTTCACTTGGTTC-3'；

内参引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

内参引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探针P12：5'-TTTGTTTTATTTCAGACGAT-3'；

探针P13：5'-CCTGAGAAGATGTTGCTGAT-3'；

探针P14：5'-GCCGTGCGGGAAAGAGCAGTG-3'；

探针P15：5'-TTTGATGGTCCATGATGC-Z4-3'；

探针P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

所述PCR反应液D包括如下引物和探针：

引物SF7：5'-AGATTCTTAGATTTTCCAGTCC-3'；

引物SR7：5'-AGAGGGTCTAGGGCCTATTCCTGATTG-3'；

引物SF8：5'-GTGAACGTTCCCAAAGTGCCAATCC-3'；

引物SR8：5'-ATACTGGACAACCCACATC-3'；

引物MF1：5'-CGCGGTCACACGATTAACCCAAGTC-3'；

引物MR1：5'-TGTTAAGCTACACTCTGGTTC-3'；

内参引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

内参引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探针P16：5'-ATAAAATACTTACTGTGGACTT-3'；

探针P17：5'-TCCATAGCCTTCTGCTTGACTGTG-Z4-3'；

探针P18：5'-GAGATCACAGCGGGTGGTAAG-3'；

探针P19：5'-ATCACCCCCTCCCCAATA-3'；

探针P20：5'-CCACTATGCTTAGCCCTA-3'；

探针P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

所述PCR反应液E包括如下引物和探针：

引物MF1：5'-CGCGGTCACACGATTAACCCAAGTC-3'；

引物MR1：5'-TGTTAAGCTACACTCTGGTTC-3'；

引物MF2：5'-AGGCTCATTCATTTCTCTAAC-3'；

引物MR2：5'-CATGGGGTTGGCTTGAAACCAGC-3'；

引物MF3：5'-CCACAACACAATGGGGCTCACTCAC-3'；

引物MR3：5'-AGGGTGGTTATAGTAGTGTG-3'；

内参引物GF1：5'-CTATGACTTAGTTGCGTTAC-3'；

内参引物GR1：5'-GAGAAGTGGGGTGGCTTTTAGGATGG-3'；

探针P21：5'-ACCGCCCGTCACCCTCCTCAA-3'；

探针P22：5'-TAGAGGAGACAAGTCGTAACAT-3'；

探针P23：5'-TTTGCCTAGATTTTATGTATACG-3'；

探针P24：5'-CGACCCCTTATTTACCGA-Z4-3'；

探针P25：5'-CGCTCCAACCGACTGCTGTCACCTTCAC-3'；

其中，探针序列中包含Z4的探针代表此探针为ZNA^TM探针，碱基下方设有下划线的为锁核酸修饰的碱基。

2.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，所述探针的5’设有荧光基团，3’设有淬灭基团，所述的荧光基团为FAM、TET、CY5、HEX或ROX中的一种；所述的淬灭基团为能与荧光基团配套的BHQ1、BHQ2或BHQ3基团中的一种。