[发明专利]基于赖氨酸浓度控制的重组表达质粒、转化子及其应用

权利要求书

1.一种重组表达质粒，包括：

第一启动子；

目的基因；

对赖氨酸响应的抑制型分子开关；

所述第一启动子控制所述目的基因的表达；

其特征在于，还包括：

第二启动子；

所述第一启动子的阻遏蛋白基因，或者编码阻遏所述目的基因表达的小分子RNA的聚核苷酸序列；

所述第二启动子控制所述对赖氨酸响应的抑制型分子开关的转录，并控制所述第一启动子的阻遏蛋白基因的表达，或者并控制所述编码阻遏所述目的基因表达的小分子RNA的聚核苷酸序列的表达；

所述对赖氨酸响应的抑制型分子开关位于所述第二启动子和所述第一启动子的阻遏蛋白基因之间，或者所述对赖氨酸响应的抑制型分子开关位于所述第二启动子和所述编码阻遏所述目的基因表达的小分子RNA的聚核苷酸序列之间；

所述对赖氨酸响应的抑制型分子开关为lysC5’-UTR序列

2.如权利要求1所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述第二启动子和所述第一启动子的阻遏蛋白基因之间用lysC5’-UTR序列连接。

3.如权利要求1所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述第一启动子是lac、tac和trc启动子中的一种，所述第一启动子的阻遏蛋白基因是阻遏蛋白lacI基因；或者，所述第一启动子是araB启动子，所述第一启动子的阻遏蛋白基因是阻遏蛋白araC基因；

或者，所述第一启动子是tet启动子，所述第一启动子的阻遏蛋白基因是阻遏蛋白TetR基因。

4.如权利要求1-3任一项所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述lysC5’-UTR序列来源于大肠杆菌(Escherichia coli)lysC基因5’上游的非翻译区，或者来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)lysC基因5’上游的非翻译区。

5.如权利要求1所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述第二启动子是诱导型启动子或组成型启动子。

6.如权利要求5所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述第二启动子是诱导型启动子，所述第一启动子也是诱导型启动子，所述第一启动子和所述第二启动子是不同系列的诱导型启动子。

7.如权利要求1所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述目的基因是目的蛋白基因。

8.如权利要求7所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述目的蛋白基因是单个蛋白基因或多个串联表达的蛋白基因。

9.如权利要求7所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述目的基因是编码多肽的聚核苷酸，或者所述目的基因是编码多肽的聚核苷酸及标记基因的串联表达基因，或者所述目的基因是标记基因。

10.如权利要求9所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述标记基因包括荧光蛋白标记基因。

11.如权利要求10所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述荧光蛋白标记基因包括RFP、GFP、YFP及它们的变种中的至少一种。

12.如权利要求9所述的一种重组表达质粒，其特征在于：所述的多肽是酶或多肽类药物。

13.如权利要求12所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述的酶是氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶和连接酶中的至少一种，所述多肽类药物是激素、抗体和生长因子中的至少一种。

14.如权利要求13所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述裂合酶是脱羧酶。

15.如权利要求14所述的一种重组表达质粒，其特征在于，所述脱羧酶是氨基酸脱羧酶。