[发明专利]肝再生相关基因c3orf43及其siRNA干扰靶点和应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学及生物医药技术领域，具体涉及一种肝再生相关基因c3orf43及其siRNA干扰靶点和应用。

背景技术

肝脏是机体的重要器官，具有储存、代谢、生物转化、解毒、造血、合成胆色素、分泌和再生等功能。研究肝再生相关基因对肝细胞增殖和肝再生的作用，对揭示肝再生机制、构建人工肝、建立治疗和预防肝病的方法等都有重要的理论意义和应用价值。目前，已有大量报道指出，应用RNAi技术特异性地向哺乳动物和人类细胞中导入siRNA来降低靶基因的表达，进而引起靶蛋白的表达下降，最终达到高效特异性的基因治疗作用。

c3orf43基因全长为4351bp，含有3个外显子和2个内含子，其中3个外显子分别位于该基因的1-211、951-1029、3764-4351bp处，其mRNA全长为878bp，共编码136个氨基酸。比较大鼠、小鼠和人的c3orf43基因序列发现，三者基因结构相似，CDS区长度基本一致。进一步通过Cluster X软件比对大鼠、小鼠和人的c3orf43氨基酸序列发现，它们的氨基酸序列相似性可达到90.74%，其保守结构域是DUF4490，属于DUF4547超家族，是个未知功能的结构域，首先在真核生物中发现具有这个结构域家族的蛋白是典型的101-220个氨基酸长度。在小鼠中，其家族成员由P53诱导表达，在DNA损伤应答中起一定作用。然而，在大鼠体内，c3orf43基因还是一个功能不详的基因，能否促进体外培养的大鼠肝细胞增殖尚不明确。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种肝再生相关基因c3orf43及其siRNA干扰靶点和应用，该c3orf43基因在细胞增殖与分化、肿瘤治疗及抗肿瘤药物研发等方面具有潜在的应用价值。

本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案：

肝再生相关基因c3orf43，其特征在于该基因c3orf43的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

肝再生相关基因c3orf43在制备促进肝再生用的物质中的应用，其特征在于：通过调节转录因子JUN、FOS和ATF2调节CCNA2、BCL2、CCND1、MYC、CCNB1和CCNB2表达共同促进肝细胞增殖。

进一步优选，所述促进肝再生用的物质为c3orf43蛋白的特异性抗体。

肝再生相关基因c3orf43的拮抗剂在制备促进肝再生用的药物中的应用。

进一步优选，所述肝再生相关基因c3orf43的拮抗剂是特异性干扰c3orf43基因表达的siRNA干扰靶点，该siRNA干扰靶点的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

本发明首次提出了一种肝再生相关基因c3orf43的功能及其应用，采用分子生物学手段首次确证基因c3orf43与肝再生有显著相关性，筛选了一条siRNA干扰靶点，为进一步的研究奠定基础。

附图说明

图1为c3orf43 siRNA转染BRL-3A细胞后c3orf43 mRNA水平表达情况图，其中C3-NC表示阴性对照，C3-S1、C3-S2和C3-S3表示c3orf43的3个siRNA片段；

图2为重组慢病毒在BRL-3A细胞中对c3orf43基因mRNA和蛋白水平的影响图；

图3为c3orf43对细胞活力的影响图，其中A为MTT法检测c3orf43干涉后对细胞活力的影响，B为MTT法检测c3orf43过表达后对细胞活力的影响；

图4为c3orf43对细胞周期的影响图，其中A为流式细胞术检测c3orf43干涉后对细胞周期变化，B为流式细胞术检测c3orf43过表达后对细胞周期变化；

图5为c3orf43对细胞增殖相关基因表达的影响，其中c3orf43-PCDH为过表达c3orf43后细胞增殖相关基因的mRNA水平的表达变化，c3orf43-SIRNA为干涉c3orf43后细胞增殖相关基因的mRNA水平的表达变化。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。

实施例