[发明专利]利用报告基因选择性富集突变核酸片段及其方法

权利要求书

1.以自杀基因作为报告基因选择性富集核酸样本中的突变核酸片段，以选择性抑制核酸样本中含等位基因的野生型基因片段的扩增，而不抑制核酸样本中含等位基因的突变型基因片段的扩增。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，以含有自杀基因的质粒载体选择性富集核酸样本中的突变核酸片段。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述核酸样本中含等位基因的野生型基因片段含有可转化为终止密码子的序列。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，核酸样本中含等位基因的野生型基因片段或突变型基因片段为10-200bp。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述核酸样本中含等位基因的突变型基因片段为点突变或移码突变。

6.自杀基因作为报告基因进行选择性富集核酸样本中的突变核酸片段的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(1)评估核酸样本情况，

(2)提供含有自杀基因作为报告基因的质粒载体，

(3)将步骤(1)中的核酸样本连接到步骤(2)中的含有自杀基因作为报告基因的质粒载体中，

(4)将步骤(3)中的质粒载体转化感受态细胞，在含有抗性筛选的琼脂培养基上培养富集，

(5)挑取筛选培养基上的菌落，测序验证。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中核酸样本中含等位基因的野生型基因片段或突变型基因片段为10-200bp，且不含终止密码子时，评估适于本方法进行后续操作。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(A)评估核酸样本情况，

(B)提供含有自杀基因的质粒，

(C)以含有自杀基因的质粒为载体，将PCR扩增的待测标本片段克隆到含有自杀基因的的载体中，

(D)将步骤(C)中的质粒载体转化H5a感受态细胞，在含有Kana霉素抗性筛选的琼脂培养基上培养富集，

(E)挑取筛选培养基上的菌落，PCR或者测序验证。

9.根据权利要求6或8所述的方法，其特征在于，所述核酸样本中含等位基因的突变型基因片段的突变为点突变；若突变前，不含有终止密码子，便不能正常在宿主细胞上生长；突变后，含有终止密码子，能在宿主细胞上生长。

10.根据权利要求6或8所述的方法，其特征在于，所述核酸样本中含等位基因的突变型基因片段的突变为移码突变；即当突变核酸片段为3的整数倍3n时，由于片段的碱基数目的是3的整数倍，不产生移码，含有该型质粒的菌落无法在培养基上生长；当突变核酸的片段不是3的整数倍，如为3n+1或者含有终止密码子，含有该型质粒的菌落就可以在培养基上生长。