[发明专利]一种用于动物类中药分子鉴定的通用DNA提取方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于动物类中药分子鉴定的通用DNA提取方法，包括：步骤1、配制裂解液PE；步骤2、对动物类中药进行样品的预处理；步骤3、提取动物类中药的DNA；步骤3.1、将步骤2中经预处理的样品与步骤1中配制的裂解液PE混匀；步骤3.2、加入广谱蛋白酶，并使用酚氯仿抽提除去蛋白质等杂质；步骤3.3、使用沉淀剂得到动物类中药的DNA。本发明还公开了一种用于动物类中药分子鉴定的通用DNA提取试剂盒。本发明提供的DNA提取方法及试剂盒可用于除壳类、分泌物类、部分加工品外不同用药部位动物药的DNA提取，所获得DNA满足中药材分子鉴定后续实验要求，保障了中药材分子鉴定的推广应用。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于动物类中药分子鉴定的通用DNA提取方法及试剂盒。

背景技术

动物类中药是中医药的重要组成部分，据第三次全国中药资源普查结果，我国药用动物有1581种。目前，77种药用动物、50种动物药被收入2015版《中国药典》(一部)。动物药具有“活性强、疗效高、效益大”的特点，在临床上常用于治疗疑难杂症、急重病症。动物药多数来源复杂，多取自动物体某一部分，常存在较多破碎的器官、组织，给传统鉴别带来挑战。近年来药用野生动物资源日益减少，药材商品供应量不足，部分动物药材、饮片价格昂贵，药材市场中掺伪、造假现象时有发生，已严重影响了动物药的用药安全，动物药鉴定需要更多的技术手段，以保证临床安全使用。现代DNA分子鉴定技术具有准确、快速鉴定物种的特点，已广泛应用于中药材及中药制剂原料药的鉴定研究。DNA分子鉴定技术已成为中药材基原物种鉴定有力的科技支撑，为保障中药安全用药提供了有效工具。

获取高质量DNA是中药材分子鉴定的前提。目前，动物药DNA提取常使用试剂盒提取，需根据用药部位的不同选用不同的试剂盒：蛇类、蛤蚧、地龙等药材肌肉组织丰富，使用通用的动物组织DNA提取试剂盒可获得较高质量DNA；角类、骨甲类等药材因DNA含量较低，需使用专用的DNAout试剂盒提取DNA；但是，使用试剂盒提取复杂动物药DNA常受到限制，如桑螵蛸、哈蟆油等药材DNA较难获取，仅局限于基原物种的鉴定研究。同时，动物药DNA提取方法不统一阻碍了动物药DNA自动化提取的应用，限制了含混合动物药成分的中成药分子鉴定技术的发展。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明提供了一种用于动物类中药分子鉴定的通用DNA提取方法及试剂盒，建立了一种简便、经济、适用范围广的动物药DNA通用方法。

本发明的技术方案如下：

本发明一方面提供了一种用于动物类中药分子鉴定的通用DNA提取方法，包括以下步骤：

步骤1、配制裂解液PE；

步骤2、对动物类中药进行样品的预处理；

步骤3、提取动物类中药的DNA；

步骤3.1、将步骤2中经预处理的样品与步骤1中配制的裂解液PE混匀；

步骤3.2、加入广谱蛋白酶，并使用酚氯仿抽提除去蛋白质等杂质；

步骤3.3、使用沉淀剂得到动物类中药的DNA。

优选地，上述动物类中药包括全体类、骨甲类、角类、组织类和其他类的动物类中药，其中全体类的动物类中药为乌梢蛇、金钱白花蛇、蕲蛇、蛤蚧、水蛭、地龙、蜈蚣、僵蚕、海龙、海马、九香虫、土鳖虫、斑蝥或全蝎中的一种或几种；骨甲类的动物类中药为龟甲、鳖甲或穿山甲中的一种或几种；角类的动物类中药为水牛角、羚羊角、鹿角或鹿茸中的一种或几种；组织类的动物类中药为蝉蜕、蛇蜕或鸡内金中的一种或几种；其他类的动物类中药为哈蟆油或桑螵蛸中的一种或两种。

优选地，上述步骤2中，预处理包括以下步骤：

步骤a、对动物类中药进行表面清洁和灭菌；