[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒及其检测方法，本发明的试剂盒采用磁性微粒包被的抗原、发光标记物标记的蛋白与待测样本中的抗体发生特异性反应而进行待测样品中抗体含量的测定。本发明的试剂盒实现猪繁殖与呼吸综合征抗体的定量检测，灵敏度高，检测范围宽，快速，重复性好，全自动操作及高通量检测的效果。

技术领域

本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征抗体检测技术领域，尤其涉及一种猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒及采用该试剂盒进行检测的检测方法。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)引起的一种高度接触性传染病，主要引起怀孕母猪流产、早产和死胎等繁殖障碍，仔猪和育肥猪出现呼吸道症状。本病的传染性极强，一旦感染，发病猪将持续高温41度以上并出现急性死亡；妊娠母猪流产率高达30％以上；仔猪则100％发病并伴随着50％以上的死亡率风险，给我国的养猪业造成严重的经济损失。

PRRSV属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，分为2个型，即欧洲型(Ⅰ型)和美洲型(Ⅱ型)。目前我国流行主要是Ⅱ型毒株。该病毒的病毒粒子中含有一个核衣壳，核衣壳由正链RNA基因组和核衣壳蛋白(N)组成，核衣壳外边包裹一层囊膜；病毒的囊膜有6种病毒结构蛋白：E、M、GP2、GP3、GP4和GP5。M、N和GP5三种蛋白是PRRS病毒的主要结构蛋白。

在我国，免疫接种是防治猪繁殖与呼吸综合征病毒的主要策略。猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒抗原蛋白起着重要的作用，也是必须的结构蛋白，免疫后能产生保护性中和抗体。免疫后猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体效价与攻毒保护具有明显的相关性，所以通过抗体水平的监测来制定合理、有效的免疫程序是提高群体免疫水平的保证。

猪繁殖与呼吸综合征抗原蛋白是主要的中和性抗原蛋白，其抗体是疫苗免疫后抗体水平的监测和病毒感染后抗体水平检测的主要标的，抗体水平高低与其免疫或感染状况直接相关，所以有猪繁殖与呼吸综合征抗体定量检测的现实需求。现有的检测机构有兽医站、疫苗公司、养殖场等存在着大量的样本，也对大通量的猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒和仪器有着需求。现有的ELISA、病毒中和试验、胶体金等的方法难以满足。

目前建立并应用的猪繁殖与呼吸综合征抗体检测方法有ELISA方法、病毒中和试验、免疫荧光法、胶体金试纸条等方法，其中ELISA方法目前是猪繁殖与呼吸综合征抗体最常用的方法，ELISA所测OD值的范围在0.1-3.5，限定了所测量的抗体范围较窄，只能做到半定量，反应的时间通常在2小时左右，时间较长；病毒中和试验是通过猪繁殖与呼吸综合征病毒和抗体在细胞上中进行抗原抗体反应来判定抗体滴度，能较全面反映中和抗体的高低，全过程为病毒滴定、抗体中和、结果判定等过程需5-7天时间，全过程只能人工来操作、判定，重复性差；免疫荧光法通常也是在细胞上操作，存在灵敏度不高，重复性差等缺点；胶体金方法能快速得出结果，但是只能定性，难以定量，限制了应用范围。

专利CN104237513A(公布日为2014.12.24)公开了一种甲状腺过氧化物酶抗体磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括TPO-Ab校准品，TPO-Ab稀释液，偶联有链霉亲和素的磁性微粒悬浮液，生物素标记的TPO-Ab抗原，鼠抗人酶标结合物，TPO-Ab质控品，化学发光液A和B，20倍浓缩洗液和反应管，该试剂盒对甲状腺过氧化物酶抗体的含量进行定量测定，实现灵敏度高，特异性，精密性，稳定性良好的效果。该试剂盒在人抗体上应用广泛，但在动物抗体上还未有报道。