[发明专利]一种猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒及其检测方法，本发明的试剂盒采用磁性微粒包被的抗原、发光标记物标记的蛋白与待测样本中的抗体发生特异性反应而进行待测样品中抗体含量的测定。本发明的试剂盒实现猪瘟E2蛋白抗体的定量检测，灵敏度高，检测范围宽，快速，重复性好，全自动操作及高通量检测的效果。

技术领域

本发明涉及猪瘟E2蛋白抗体检测技术领域，尤其涉及一种猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒及采用该试剂盒进行检测的检测方法。

背景技术

猪瘟又称经典猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)，是由猪瘟病毒(Classicalswine fever virus,CSFV)引起猪的高度致死性、接触性传染病。是世界粮农组织和各国政府密切关注的主要传染病之一。根据OIE制定的《陆生动物卫生法典》2005年版，CSF被列为法定报告的疫病之一，在我国被列为“一类动物疫病”，给我国养猪业带来了巨大的经济损失。

我国则采取免疫、检疫和淘汰带毒猪的综合防疫措施，促进建立无规定动物疫病区，猪瘟兔化弱毒疫苗及猪瘟E2亚单位疫苗是我国用于猪瘟预防控制的重要手段。通过抗体水平的监测来制定合理、有效的免疫程序是提高群体免疫水平的保证。多年来，由于科研和市场的广大需求，人们一直致力于猪瘟抗体检测试剂盒的开发。目前建立并应用的方法有ELISA方法、病毒中和试验法、免疫荧光法、胶体金试纸条等方法。

猪瘟E2蛋白是猪瘟主要的中和性抗原蛋白，其抗体是疫苗免疫后抗体水平的监测和病毒感染后抗体水平检测的主要标的，抗体水平高低与其免疫或感染状况直接相关，所以有猪瘟E2蛋白抗体定量检测的现实需求。现有的检测机构有兽医站、疫苗公司、养殖场等存在着大量的样本，也对大通量的猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒和仪器有着需求。现有的ELISA、胶体金等的方法难以满足。

目前建立并应用的猪瘟E2蛋白抗体检测方法有ELISA方法、病毒中和试验、免疫荧光法、胶体金试纸条等方法。ELISA方法目前是猪瘟E2蛋白抗体最常用的方法，ELISA所测OD值的范围在0.1-3.5，限定了所测量的抗体范围较窄，只能做到半定量，反应的时间通常在2小时左右，时间较长；病毒中和试验是通过猪瘟E2蛋白和抗体在细胞上中进行抗原抗体反应来判定抗体滴度，能较全面反映中和抗体的高低，全过程为病毒滴定、抗体中和、结果判定等过程需5-7天时间，全过程只能人工来操作、判定，重复性差；免疫荧光法通常也是在细胞上操作，存在灵敏度不高，重复性差等缺点；胶体金方法能快速得出结果，但是只能定性，难以定量，限制了应用范围。

专利CN104237513A(公布日为2014.12.24)公开了一种甲状腺过氧化物酶抗体磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括TPO-Ab校准品，TPO-Ab稀释液，偶联有链霉亲和素的磁性微粒悬浮液，生物素标记的TPO-Ab抗原，鼠抗人酶标结合物，TPO-Ab质控品，化学发光液A和B，20倍浓缩洗液和反应管，该试剂盒对甲状腺过氧化物酶抗体的含量进行定量测定，实现灵敏度高，特异性，精密性，稳定性良好的效果。该试剂盒在人抗体上应用广泛，但在动物抗体上还未有报道。

目前猪瘟E2抗体检测主要采用的是半定量的ELISA方法并不能满足定量需求，这一点主要是由于缺乏猪瘟E2抗体标准品和定量标准、没有准确可重复性的检测方法造成的。与兽医不同，在人医领域，各个疾病的标志物，例如上述的甲状腺过氧化物酶抗体，都已经得到充分研究，建立了通用的国家标准、国际标准或行业标准，定量简单易行，因此不同厂家生产的产品得到了规范，检测结果一致性较好。而在兽医领域，目前的猪瘟E2抗体检测市场大部分被进口的ELISA定性检测试剂占据，并且各厂家的产品检测结果相差很大，不利于畜牧养殖业发展，亟需建立定量标准以及准确可靠重复性佳的检测方法。

发明内容

为了解决现有兽医检测技术中存在的检测时间长、难以定量、重复性差、难以自动化等的问题，本发明的目的是提供一种猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒，它可以定量检测猪瘟E2蛋白抗体的含量。为此，本发明还提供一种利用该试剂盒进行检测的方法，本发明的检测方法灵敏度高、定量检测且检测范围宽、检测时间短、重复性好。