[发明专利]一种猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于，包括猪瘟E2蛋白偶联或间接偶联磁性微粒的溶液，发光标记物标记的蛋白溶液和发光底物；其中，所述偶联包括通过磁性微粒羧基与蛋白氨基缩合形成酰胺、磁性微粒氨基与蛋白氨基通过戊二醛交联形成五碳桥、甲苯磺酰基磁性微粒与蛋白氨基共价偶联相连接；

所述猪瘟E2蛋白为猪瘟病毒E2蛋白全长、片段或多肽中的一种；

所述磁性微粒为以Fe₃O₄为核心，表面覆有聚合物涂层，并导入羧基或甲苯磺酰基基团的微粒；所述磁性微粒的大小为1-3μm；

所述猪瘟E2蛋白的最佳用量范围为0.64-4nmol/10mg磁性微粒；

所述试剂盒中还包括稀释液，质控品，校准品和清洗液，稀释液选自缓冲液、牛血清白蛋白、阻断剂、单克隆抗体，多克隆抗体中的一种或多种的组合；

所述质控品为猪瘟E2蛋白抗体低值质控品和高值质控品，所述低值质控品的质控范围为24-36U/mL，高值质控品的质控范围为80-120U/mL；所述清洗液为0.05mol/LpH为8.0的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液或0.01mol/L pH为7.0的磷酸盐(PBS)缓冲液，所述Tris缓冲液和PBS缓冲液中分别含有0.1％的Tween-20。

2.如权利要求1所述的猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于，所述猪瘟E2蛋白偶联磁性微粒的溶液制备方法包括如下步骤：

S1，取含磁性微粒的溶液，采用缓冲液清洗磁性微粒，并悬浮于缓冲液中；

S2，加入纯化的猪瘟E2蛋白；

S3，加入交联剂或催化剂，振荡反应；

S4，磁铁吸附磁性微粒，洗涤，悬浮在含有封闭剂的溶液中。

3.如权利要求1所述的猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于，所述猪瘟E2蛋白间接偶联磁性微粒的溶液的制备方法包括如下步骤：

1)磁性微粒结合亲和素

S1，取含磁性微粒的溶液，采用缓冲液清洗磁性微粒，并悬浮于缓冲液中；

S2，加入亲和素；

S3，加入交联剂或催化剂，振荡反应；

S4，磁铁吸附磁性微粒，洗涤，悬浮在含有封闭剂的溶液中，构成磁性微粒-亲和素复合物；

2)猪瘟E2蛋白结合生物素

S1，取猪瘟E2蛋白，透析；

S2，加入生物素，反应；

S3，加入封闭剂，反应；

S3，透析除去未结合的生物素，获得猪瘟E2蛋白-生物素；

3)磁性微粒-亲和素与猪瘟E2蛋白-生物素复合物混合，通过亲和素与生物素的结合力连接磁性微粒与猪瘟E2蛋白。

4.如权利要求1所述的猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光标记物标记的蛋白溶液的制备方法包括如下步骤：

S1，取与猪瘟E2蛋白或猪瘟E2病毒抗体特异性结合的蛋白，透析；

S2，加入发光标记物，反应；

S3，加入封闭剂，反应；

S4，透析分离未结合的发光标记物。

5.如权利要求1所述的猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光标记物选自吖啶酯、碱性磷酸酶、过氧化物酶中的任意一种，所述发光标记物标记的蛋白选自猪瘟病毒E2抗原、单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体、抗猪IgG抗体、抗猪IgM抗体中的一种或多种的组合。

6.如权利要求1所述的猪瘟E2蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于，所述发光底物与发光标记物一一对应。