[发明专利]一种利用环糊精葡萄糖基转移酶转糖基反应提高染料木素水溶性的方法

权利要求书

1.一种产环糊精糖基转移酶的基因工程菌，其特征在于：

1)采用化学全合成或PCR方法克隆GenBank accession no.JX412224所示的co-α-CGTase基因序列；

2)将步骤1)获得的环糊精葡萄糖基转移酶基因连接至大肠杆菌表达载体pET20b(+)，得到重组表达载体；

3)将步骤2)获得的重组表达载体转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)得到基因工程菌。

2.一种应用权利要求1所述基因工程菌发酵生产环糊精葡萄糖基转移酶的方法，其特征在于：

以产环糊精葡萄糖基转移酶的基因工程菌为生产菌株，活化后接种至含100μg/mL氨苄青霉素的TB液体培养基；在适当温度(30～37℃)振荡培养至OD₆₀₀＝0.6～0.8，加入0.01mM终浓度的IPTG诱导胞外表达，并在低温(16～25℃)继续振荡培养一定时间(85～95h)后，低温离心除去菌体，收集富含环糊精葡萄糖基转移酶的上清液。

3.一种应用权利要求2所述环糊精葡萄糖基转移酶的纯化方法，其特征在于：

向所述上清液中采用硫酸铵盐析，低温离心并取沉淀物复溶后透析除盐。通过镍柱亲和层析后，获得纯化后的环糊精葡萄糖基转移酶。

4.一种应用权利要求3所述纯化后的环糊精糖基转移酶催化染料木素糖基化反应，其特征在于：

分别以染料木素(溶解于DMSO)作为糖基受体；以α-环糊精(溶解于50mM,pH 6.5PBS缓冲液)作为糖基供体，通过环糊精糖基转移酶催化合成糖基化染料木素。