[发明专利]将原始生殖细胞分化为功能上成熟的卵母细胞的培养方法

权利要求书

1.通过体外培养将原始生殖细胞分化成功能GV期卵母细胞的方法，包括：

(a)通过在消除雌激素或具有与雌激素相似的功能的因子的影响的条件下，培养原始生殖细胞和邻近所述原始生殖细胞的支持细胞来产生次级卵泡的步骤；

(b)部分地切割颗粒细胞层和膜细胞层之间的结合的步骤，其中卵母细胞、颗粒细胞层和膜细胞层构成所产生的次级卵泡；和

(c)通过在含有高分子化合物的培养基中培养构成所述次级卵泡的卵母细胞、颗粒细胞层和膜细胞层，使卵母细胞分化为功能GV期卵母细胞的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)中在消除雌激素或具有与雌激素相似的功能的因子的影响的条件下的培养包括在雌激素抑制剂的存在下培养或使用无血清培养基培养。

3.根据权利要求2所述的方法，其中步骤(a)中使用的雌激素抑制剂是雌激素受体拮抗剂。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中步骤(b)中，所述结合的部分地切割是通过酶处理和/或通过物理手段进行。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中在步骤(c)中，高分子化合物为选自由以下所组成的组中的至少一种化合物：聚乙烯吡咯烷酮、菲可羟丙基甲基纤维素和血清白蛋白。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法获得的GV期卵母细胞。

7.用于制备功能卵子的方法，包括：

将根据权利要求1-5中任一项所述的方法获得的GV期卵母细胞进行体外成熟培养以恢复减数分裂的步骤。

8.根据权利要求7所述的方法获得的卵子。

9.体外将原始生殖细胞分化成功能的卵母细胞或卵子的试剂盒，包括：

雌激素抑制剂、无血清培养基、血清替代物、用于切割细胞间结合的酶、或高分子化合物、或其组合。