[发明专利]使用往复运动搅拌装置的血小板的制造方法

说明书

本发明提供一种方法，是血小板的制造方法，其包括在培养容器内的培养液中培养巨核细胞的工序，在该培养工序中，使搅拌叶片往复运动来搅拌培养液。

技术领域

本发明涉及使用搅拌叶片往复运动的搅拌装置的血小板的制造方法。

背景技术

出于治疗和预防其症状的目的，针对随着手术时、受伤时的大量出血、或者抗癌剂治疗后的血小板减少而表现出出血趋势的患者，给予血小板制剂。目前，血小板制剂的制造依赖于由健康志愿者进行的献血。但是，在日本，因人口构成而引起献血者数量减少，推测在2027年，有大约100万人份的献血缺口。因此，作为本发明的技术领域的目的之一，可举出血小板的稳定供给。

另外，由于现有的血小板制剂因细菌污染导致的风险高，所以可能在血小板制剂的植入后引起严重的传染病。因此，在临床实践中，始终寻求更安全的血小板制剂。为了满足这种需求，如今开发了从在体外(in vitro)培养出的巨核细胞中生产血小板的方法。

以往，从培养细胞生产血小板通过使用了培养皿的静置培养系统来进行(WO2014/100779A1，Qiang Feng,et al.,StemCellReports)。但是，静置培养系统非常耗费人力，不适于大量培养。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2014/1007791号小册子

非专利文献

非专利文献1：Qiang Feng,et al.,Stem Cell Reports 3 1-15(2014)

发明内容

技术问题

本发明的发明人等通过利用使用了摇瓶的振摇培养系统，即，使用使培养容器本身振摇的培养方法，成功生产了具有高生理活性的血小板。但是，明确了在摇瓶培养系统中，随着培养基量的规模的扩大，会引起血小板(CD41a+CD42b+)生产量和血小板的生理活性(PAC1结合性，P-选择素阳性)降低。

此外，发现在摇瓶培养系统中发生了认为是由脱落反应等引起的血小板的劣化反应(CD42b阳性率降低)。此外，还发现含有大量不适于向生物体植入的异常的血小板(膜联蛋白V阳性的血小板)。

因此，本发明的课题在于提供以大规模的量生产能够向生物体植入的高品质的血小板的方法。

技术方案

本发明的发明人等为了解决上述课题反复进行了研究，其结果发现不使培养容器振摇，而是通过边使配置于培养容器内的搅拌叶片往复运动边搅拌培养液来培养巨核细胞，从而能够提高血小板的生产效率和生理活性，并且将血小板的劣化抑制得低，能够减少异常血小板。此外，对使用往复运动搅拌装置的搅拌培养时的细胞密度、其他条件进行了研究，从而完成了本发明。

即，本发明提供一种方法，是血小板的制造方法，包括在培养容器内的培养液中培养巨核细胞的工序，在上述培养工序中，使用搅拌叶片不是朝着一个方向运动而是进行往复运动或反向旋转的非常规的搅拌装置来搅拌上述培养液。

另外，在本发明的血小板的制造方法中，优选上述培养容器为密闭型生物反应器。

另外，在本发明的血小板的制造方法中，上述巨核细胞是在与巨核细胞相比分化程度低的细胞中使选自癌基因、多梳基因和细胞凋亡抑制基因中的至少一个基因强制表达之后，解除该强制表达而得到的细胞。

另外，本发明提供一种方法，是血小板制剂的制造方法，包括：通过以上记载的方法使巨核细胞产生血小板，从培养物中回收血小板的工序；以及从上述血小板中除去血小板以外的血细胞系细胞成分的工序。