[发明专利]分离抗体的分离基质和方法

权利要求书

1. 一种包含抗体-结合蛋白配体已被共价固定于其上的多孔球形粒子的分离基质，其中所述配体的密度大于10 mg/ml和所述粒子的体积-加权中位直径在30-55 μm的范围内。

2. 权利要求1的分离基质，其中所述配体的密度在10.5-15 mg/ml的范围内，例如11-15 mg/ml。

3.权利要求1或2的分离基质，其中所述多孔球形粒子包含交联多糖。

4.任一项前述权利要求的分离基质，其中所述多孔球形粒子包含交联琼脂糖。

5.权利要求4的分离基质，其中琼脂糖在凝胶化之前已被烯丙基化。

6. 任一项前述权利要求的分离基质，其中所述多孔球形粒子具有0.6-0.8，例如0.6-0.7的凝胶相分配系数，其表示为对于分子量110 kDa的葡聚糖的KD。

7.任一项前述权利要求的分离基质，其中所述配体包含Fc-结合蛋白。

8.权利要求7的分离基质，其中所述Fc-结合蛋白是蛋白A。

9.任一项前述权利要求的分离基质，其中所述配体包含蛋白A结构域的单体、二聚体或多聚体。

10.权利要求9的分离基质，其中一个或多个所述结构域已被突变。

11.权利要求10的分离基质，其中一个或多个所述结构域衍生自蛋白Z，或蛋白A的B或C结构域，并且其中在位置23的氨基酸残基是苏氨酸。

12. 权利要求9-11的任一项的分离基质，其中一个或多个所述结构域包含如由SEQ IDNO: 8或9定义的氨基酸序列。

13. 任一项前述权利要求的分离基质，其在20 +/- 2℃，在0.5 M NaOH中孵育5小时后保留至少95%的其原始结合能力。

14.一种色谱柱(1)，其包含依据任一项前述权利要求的分离基质。

15. 权利要求14的色谱柱，其包含所述分离基质的填充床(2)，其中所述填充床具有至多5或10 cm，例如2-5 cm或2-4 cm的床高(h)。

16.一种色谱系统(10)，其包含多个依据权利要求14或15的色谱柱(11、12、13)。

17.权利要求16的色谱系统，其被安排执行连续的色谱。

18.权利要求16或17的色谱系统(10)，其包含至少两个，例如至少三个，依据权利要求12或13的色谱柱(11、12、13)，所述色谱柱填充有相同的分离基质并与一个或多个连接管道(14、15、16)连接，以致液体可从一个柱流向随后的一个柱并从最后的柱流向第一个柱，且其中两个柱之间的每个连接管道包括至少一个开/关阀(17、18、19)。

19.一种通过亲和色谱分离抗体的方法，该方法包括以下步骤：

a) 输送过程进料穿过至少依据权利要求14-15的任一项的第一色谱柱，以吸附来自所述进料的抗体；

b) 任选地洗涤所述第一色谱柱；

c) 输送洗脱液穿过所述第一色谱柱以洗脱抗体；和

d) 回收含抗体的所述洗脱液。

20.权利要求19的方法，其在权利要求16-18的任一项的色谱系统中进行。