[发明专利]用于增加单体抗体FAB-DSFV多聚体种类的百分比的方法

权利要求书

1.增加重组表达的抗体分子的组合物中单体百分比的方法，其特征在于所述抗体分子包含至少一个对目标抗原具有特异性的Fv，所述Fv包含一个V_H和一个V_L，其中所述V_H和V_L通过一个或多个接头间接连接或直接连接并通过其间的二硫键稳定，其中所述抗体分子选自Fab-dsFv、Fab-dsscFv和Fab-2xdsscFv，所述方法包括：

a)将包含抗体分子的组合物在50℃的温度下保持至少1小时时间段的热转化步骤，

b)其中步骤a)在用还原剂处理后进行，其中所述还原剂是2-巯基乙胺(BMEA)，并且还原剂的浓度在1mM至100mM的范围内。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述还原剂的浓度在30至90mM的范围内。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述还原剂的浓度在60至90mM的范围内。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述还原剂的浓度在70至80mM的范围内。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述时间段在1至70小时的范围内。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述时间段在3至10小时的范围内。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述时间段在4至6小时的范围内。

8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中步骤a)在50℃的温度下进行4-6小时时间段，并且在步骤b)中所述还原剂BMEA在60至90mM的浓度范围内。

9.根据权利要求8所述的方法，其中步骤a)在50℃的温度下进行5小时时间段，并且在步骤b)中所述还原剂BMEA在70至80mM的浓度范围内。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述还原剂在氨基酸存在下使用。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述氨基酸选自精氨酸、赖氨酸和脯氨酸。

12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其中所述氨基酸的浓度在0.01至1.0M的范围内。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体分子在所述组合物中的浓度为0.5g/L至5g/L。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述热转化步骤在伴随搅拌的情况下进行。

15.根据权利要求14所述的方法，其中在100至1200rpm的范围内进行搅拌。

16.根据权利要求1所述的方法，其中在所述温度升高至50℃之前，将还原剂添加至所述重组表达的抗体分子的组合物中。

17.根据权利要求1所述的方法，其还包括下游纯化步骤。

18.根据权利要求17所述的方法，其中下游处理包括色谱步骤。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述色谱是疏水相互作用色谱。

20.根据权利要求18所述的方法，其中所述色谱是离子交换色谱。

21.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体分子是Fab-dsFv。