[发明专利]用于核酸分离的自动化方法

权利要求书

1.一种用于从含核酸的起始材料分离和/或纯化核酸的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在至少一种离液剂化合物和至少一种醇的存在下，通过使所述含核酸的起始材料与核酸结合载体接触，使所述核酸结合于核酸结合支撑材料；以及

(b)可选地使用洗脱缓冲液从所述核酸结合支撑材料洗脱结合的核酸；

所述方法的特征在于

(i)所述醇是具有4或5个碳原子的醇并且以17％(v/v)至60％(v/v)的浓度存在于步骤a)中，以及

(ii)所述至少一种离液剂化合物以1.5M至5M的浓度存在于步骤a)中。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，没有将蛋白酶加入步骤a)，或在即将使所述含核酸的起始材料经受步骤a)时，没有用蛋白酶(或其它等效蛋白酶预处理)进行孵育。

3.根据权利要求1或2所述的方法，具有4或5个碳原子的所述醇是一元醇，优选选自由正丁醇、仲丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基1-丁醇、3-甲基1-丁醇、2,2-二甲基1-丙醇、2-甲基2-丁醇、3-甲基2-丁醇、或它们的混合物组成的组，更优选选自由正丁醇、1-戊醇、仲丁醇、异丁醇、叔丁醇、或它们的混合物组成的组，最优选是正丁醇。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述具有4或5个碳原子的醇以20％(v/v)至55％(v/v)的浓度存在于步骤a)中，优选25％(v/v)至50％(v/v)，更优选30％(v/v)至45％(v/v)，最优选35％(v/v)至40％(v/v)。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述至少一种离液剂化合物选自硫氰酸盐、异氰酸盐、高氯酸盐、氢氯化物、或它们的混合物；以及优选是硫氰酸胍鎓。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述至少一种离液剂化合物以2M至4.5M的浓度存在于步骤a)中，优选2.5M至4M，更优选3M至3.5M。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述含核酸的起始材料是选自由以下各项组成的组的液体生物样品：全血、血清、血浆、脑脊液(CSF)、和尿。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，在自动化系统上进行所述方法，其中在可拆卸夹座上进行步骤a)和b)。

9.一种用于检测目标核酸的自动诊断方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将含核酸的起始材料提供到自动化系统中，

(b)根据权利要求1-6所述的分离和/或纯化方法，在所述自动化系统中分离和/或纯化核酸；

(c)在所述自动化系统中对在步骤(b)中分离和/或纯化的目标核酸进行扩增；以及

(d)检测在步骤(c)中扩增的所述目标核酸。

10.根据权利要求9所述的自动诊断方法，其中，在夹座上进行至少所述步骤(b)和(c)。

11.一种用于分离和/或纯化核酸的水性提取缓冲液，所述缓冲液包含

(i)具有4或5个碳原子的醇，优选是正丁醇，浓度为20％(v/v)至65％(v/v)，优选35％(v/v)至60％(v/v)，最优选40％(v/v)至50％(v/v)以及

(ii)至少一种离液剂化合物，浓度为3.3M至6.7M，优选3.5M至5.5M，最优选3.7M至4.5M。

12.一种用于从含有核酸的起始材料分离和/或纯化具有长度<250nt的细胞外核酸和/或短链核酸的试剂盒，所述试剂盒包含权利要求11所述的提取缓冲液。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其中，在与自动化系统可接合的夹座内提供所述提取缓冲液。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其中，所述夹座进一步包括核酸分离和/或纯化室，所述核酸分离和/或纯化室包含适用于结合核酸的核酸结合支撑材料，所述核酸分离和/或纯化室容纳所述提取缓冲液或与容纳所述提取缓冲液的另一室流体连通。

15.权利要求1-8中任一项所述的方法、权利要求11所述的提取缓冲液、或权利要求12-14中任一项所述的试剂盒用于以下任一项的用途

-分离和/或纯化细胞外核酸，

-分离和/或纯化长度<250nt的短链核酸，最优选<100nt；

-分离和/或纯化病毒核酸，

-诊断感染、病理病症、或生理病症。