[发明专利]治疗营养不良型大疱性表皮松解症的反义寡核苷酸

说明书

一种能够防止或减少外显子80包含到人COL7A1 mRNA中的反义寡核苷酸，以及用于防止或减少外显子80包含到人COLA1 mRNA中的方法。

技术领域

本发明涉及适用于治疗人类疾病的寡核苷酸。更具体地，本发明涉及适用于治疗营养不良型大疱性表皮松解症的反义寡核苷酸(AON)。

背景技术

大疱性表皮松解症(EB)是一组可遗传的皮肤疾病，其特征在于皮肤和黏膜的慢性脆性和起疱。根据亚型，EB的症状范围非常广，从最小的皮肤脆性到具有全身并发症的非常严重的症状。全球约35万患者受影响。在某些形式的EB中，还可以涉及指甲、头发和牙齿。EB的主要类型包括单纯型EB(EBS)、交界型EB(JEB)、营养不良型EB(DEB)和金德乐综合征(KS)(Fine等人，2014)。

DEB影响约25％的EB患者，可显性或隐性遗传，并涉及VII型胶原蛋白(COL7A1，联机孟德尔人类遗传数据库(OMIM)120120)缺陷。COL7A1编码胶原蛋白VII的α-1链。胶原蛋白VII用作真皮上部到致密板(基底膜的部分)的锚原纤维。在翻译后修饰之后，三个相同的α-1链借助它们的胶原三螺旋结构域折叠在一起。随后，形成反向平行二聚体，其排列以形成锚原纤维。胶原蛋白VII由角质形成细胞和真皮成纤维细胞在皮肤中合成。DEB疾病严重程度与在基底膜区域的VII型胶原蛋白表达量大体相关。

显性营养不良型EB(DDEB)的特点包括可局限于手、脚、肘和膝盖或可以是全身性的起疱。常见的发现包括瘢痕、粟粒疹、黏膜受累、和异常或缺失指甲。隐性营养不良型EB(RDEB，约50％的DEB患者)通常比DDEB更具全身性且更严重。除了DDEB的症状之外，RDEB的其它常见表现包括营养失调、贫血、骨质疏松、食管狭窄、生长迟缓、蹼化或引起连指手套状并指(并指(趾)畸形(pseudosyndactyly))的手指和脚趾的融合、形成肌肉挛缩、牙齿畸形、小口畸形和眼睛瘢痕化。在该组中，鳞状细胞癌的风险以及来自转移性鳞状细胞癌的死亡大大增加。

在基因COL7A1内已知有多于400种不同的突变。最普遍受影响的外显子中的一个(7％的RDEB)是具有超过3种不同的突变的外显子80，这些突变是错义突变或导致提前终止密码子(PTC)的突变。由于COL7A1基因的大部分外显子都在框架(frame)中这一事实，所以外显子跳跃可能是在保留蛋白质功能的同时消除具有PTC突变的外显子的可行策略(Goto等，2006)。

目前不存在对DEB的治疗，只能进行缓和疗护。严重形式的RDEB对社会医疗保健预算造成高昂的费用：每名患者每年的敷料和药物的平均费用约为20万欧元。DEB患者的预期寿命在30至40岁之间。

法国国家健康与医学研究院(Institut National de la Santé et de laRecherche Médicale)(INSERM)的WO2013/053819公开了两种具有与外显子80互补的22个核苷酸和与上游内含子互补的2个核苷酸的24聚(24mer)反义寡核苷酸，其导致整个外显子从mRNA跳跃(也参见图1)：

ESE80.3 GGCC UCUU GGAC CCUG CAGA CCCU(SEQ ID NO：2)

ESEg0.3-Q2I70X GGCC UCUU GGAC CCUA CAGA CCCU(SEQ ID NO：3)

外显子80缺失的mRNA最有可能翻译为功能性多肽，尽管该多肽比野生型蛋白质短，但其表现与野生型胶原VII类似。本发明的发明人在人原代成纤维细胞(HPF)和HeLa细胞中测试WO2013/053819中公开的寡核苷酸，以评估其跳跃效率。似乎在所测试的条件下，两种AON都显示出小于50％的跳跃效率，同时ESE80.3表现得略好于ESE80.3-Q2170X。尽管这些外显子跳跃的寡核苷酸提供了解决这种可怕疾病的有希望的第一步，但显然，仍然需要进一步的替代寡核苷酸来提高外显子80跳跃的效率。

发明内容