[发明专利]溶血素方法和组合物

权利要求书

1.一种增加通过化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)产生的溶血素的产率的方法，其中所述方法包含：A)在含有葡萄糖以及选自由以下组成的群组的额外浓缩碳源的基础培养基中生长化脓隐秘杆菌：葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、寡糖、甘油、乳糖、聚葡萄糖、糊精、丁二酸单甲酯和N-乙酰基葡糖胺；B)在所述培养基中的葡萄糖耗尽之前添加螯合剂至所述培养基，其中螯合剂为乙二醇四乙酸(EGTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)或两个的组合；C)收获化脓隐秘杆菌，和D)分离溶血素。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述额外浓缩碳源为乳糖。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述螯合剂为EGTA。

5.根据权利要求1所述的方法，其中化脓隐秘杆菌复制为在600nm处光学密度(O.D.)高于5的细菌细胞密度。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养基维持于21-37℃之间的温度。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述培养基维持于28-32℃之间的温度。

8.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含使用所述基础培养基，其中所述培养基的pH在6.0与8.0之间。

9.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含使用所述基础培养基，其中所述培养基包含血晶素作为铁源。

10.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含使用包含聚山梨醇酯80(Tween 80)的所述基础培养基。

11.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含使用包含维生素溶液的所述基础培养基。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述维生素溶液包含以下中的一种或多种：维生素B12；肌醇；尿嘧啶核碱基；烟碱酸；泛酸钙；吡哆醛-HCl；吡哆胺-2HCl；核黄素；硫胺素-HCl；对氨基苯甲酸；生物素；叶酸；烟碱酰胺；和β-NAD。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述维生素溶液包含吡哆醛-HCl。

14.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含使培养基的pH减少到5.50与6.50之间的水准，且接着通过自动添加碱性滴定剂而将所述pH控制于5.50与6.50之间。

15.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含分离化脓隐秘杆菌蛋白酶与所述溶血素。

16.根据权利要求15所述的方法，其中化脓隐秘杆菌蛋白酶与溶血素的所述分离是通过色谱步骤实现。

17.根据权利要求7所述的方法，其进一步包含使用所述基础培养基，其中所述培养基的pH在6.0与8.0之间。

18.根据权利要求17所述的方法，其进一步包含使用所述基础培养基，其中所述培养基包含血晶素作为铁源。

19.根据权利要求18所述的方法，其进一步包含使用包含聚山梨醇酯80(Tween 80)的所述基础培养基。

20.根据权利要求19所述的方法，其进一步包含使用包含维生素溶液的所述基础培养基。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述维生素溶液包含吡哆醛-HCl。

22.根据权利要求21所述的方法，其进一步包含使培养基的pH减少到5.50与6.50之间的水准，且接着通过自动添加碱性滴定剂而将所述pH控制于5.50与6.50之间。