[发明专利]针对NKG2D和肿瘤相关抗原的二价抗体

说明书

相关专利申请的交叉引用

本申请要求于2015年2月20日提交的美国临时申请62/118,561和于2015年2月23日提交的美国临时申请62/119,645的权益，这两个临时申请据此全文以引用方式并入本文。

背景技术

2014年，诊断出160万新癌症病例并且报告了585,720例死亡。目前的治疗主要依赖于化学疗法、放射、外科手术和骨髓移植。然而，这些治疗可能与严重的副作用相关联，并且在一些情况下，癌症对这些治疗并无反应。因此，迫切需要新型疗法。癌症免疫疗法很有前景，因为它们具有高度特异性，并且能有效地从淋巴细胞诱导肿瘤裂解活性。融合蛋白诸如双特异性T细胞接合器或双特异性杀伤细胞接合器(BiTE和BiKE)是分别在肿瘤细胞与T细胞(或自然杀伤细胞)之间形成关联的癌症免疫疗法。BiTE或BiKE蛋白具有不同抗体的两个单链可变片段(scFvs)，其中一者结合肿瘤特异性分子，另一者结合淋巴细胞表面上的受体。预计相对于常规抗体疗法而言，BiTE和BiKE疗法在肿瘤细胞裂解方面的功效要高100-10,000倍。然而，BiTE疗法特异性地靶向T细胞表面上的CD3受体，而BiKE疗法靶向自然杀伤细胞表面上的受体。目前，尚无双特异性接合器蛋白被设计用于交叉触发所有杀伤免疫细胞，包括CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞和γδT细胞等。

发明内容

公开了一种结合肿瘤相关抗原(TAA)和NKG2D受体的多肽。该多肽可包含与TAA结合的抗体或其片段。在一些实施方案中，TAA可为CS-1或EGFRvIII(因此所述抗体或片段为“CS-1抗体”或“EGFRvIII抗体”)。该多肽还可包含与NKG2D受体结合的抗体或其片段(“NKG2D抗体”)。因此该多肽可包含NKG2D抗体和CS-1抗体或EGFRvIII抗体。在一些实施方案中，TAA抗体和/或NKG2D抗体是单链可变片段(scFv)抗体。

在一些实施方案中，该多肽是由表达TAA抗体和NKG2D抗体的核酸所表达的融合蛋白。在一些实施方案中，TAA抗体和NKG2D抗体是化学缀合在一起而形成所公开的多肽的单独肽。

在多肽的一些实施方案中，TAA抗体和NKG2D抗体由非免疫原性接头接合在一起。非免疫原性接头可包括人肌肉醛糖蛋白质的氨基酸序列、其片段、其变体或它们的任何组合。

NKG2D受体由细胞毒性T细胞、γ-δT细胞、自然杀伤(NK)细胞和NKT细胞表达，这些细胞一般可在本文统称为“杀伤细胞”。NKG2D受体在结合于该蛋白后可活化杀伤细胞。这种活化可包括使杀伤细胞变得有细胞毒性。

CS-1是由多发性骨髓瘤细胞表达的抗原。EGFR III型变体(EGFRvIII)在其胞外结构域中具有缺失，导致形成胶质母细胞瘤以及乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和肺癌中所发现的新的肿瘤特异性靶标。

因此，所公开的多肽可结合于由某些癌症表达的TAA诸如CS-1或EGFRvIII，以及由杀伤细胞表达的NKG2D受体。所公开的多肽可同时结合由癌细胞表达的TAA以及由杀伤细胞表达的NKG2D受体，从而在癌细胞与杀伤细胞之间形成桥。这种桥可促进在肿瘤细胞与杀伤细胞之间形成免疫裂解性突触。杀伤细胞可将穿孔素和/或颗粒酶释放于免疫突触上方，并因此诱导多发性骨髓瘤细胞的死亡。死亡可包括癌细胞的裂解。这样，所公开的多肽通过募集和活化杀伤细胞而实现癌细胞的靶向杀伤。

还公开了用于治疗对其有需要的受试者体内的癌症诸如多发性骨髓瘤、胶质母细胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和肺癌的方法。该方法可包括向受试者施用上述多肽。在一些情况下，该多肽以治疗有效量施用。

本发明的一个或多个实施方案的细节在下面的附图和说明书中示出。本发明的其它特征、目的和优点可以从说明书和附图以及权利要求书中明显看出。

附图说明

图1是抗CS-1三特异性细胞毒性淋巴细胞接合器(TriCLE)多肽设计的示意图。抗CS-1单链可变片段(scFv)和抗NKG2D scFv由人肌肉醛糖(HMA)接头接合在一起。VH：重链；VL：轻链；(G4S)3：甘氨酸-丝氨酸接头；6XHis：6组氨酸重复序列。

图2示出了确认经纯化的蛋白为含scFv的抗CS-1 TriCLE的蛋白质印迹。