[发明专利]一步精制他克莫司粗品中他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素的方法

说明书

本发明涉及一种一步精制他克莫司粗品中他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素的方法，步骤如下：将他克莫司粗品展层于装有特制填料体的不锈钢层析柱柱头，用溶剂：水为60；40,酸调PH值为4.5加展层剂5％为洗脱剂进行层析洗脱，分布收集，浓缩纯品，结晶，重结晶得他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素纯品。本发明方法得到的他克莫司，双氢他克莫司，子囊霉素检测HPLC纯度〉98％，本发明操作方便，工艺简单，成本低廉，已运用与中试投产，非常适合工业化生产。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及发酵产物分离，纯化方法，特别涉及到一步精制他克莫司粗品中药效组分他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素的方法。

背景技术

他克莫司(tacrolimus,FK506)是由日本藤泽药品工业公司在1984年自日本筑波山土壤中分离的筑波链霉菌(streptomyces tsukubaensis)No.9993的发酵液中提取得到的一种新型二十三元大环内酯聚酮免疫抑制剂。临床研究表明，其免疫抑制活性是传统免疫剂环孢素A的10-100倍。目前已广泛应用于肝脏，骨髓移植，对其它药物耐药肾移植的排斥防治，白塞氏病，变性性皮炎，银屑病，鱼鳞病，斑秃，类风湿性关节炎，牛皮藓，多发性硬化病，糖尿病等多种自身免疫疾病的治疗。自在中国上市的短短时间内，市场份额迅速上升，已成为肝脏及肾移植后排斥反应的临床一线药物。子囊霉素(FK520)是发酵他克莫司的副产物，也是一种生物免疫抑制剂，可作为多种新药物的中间体，开发成功典型的有吡美莫司。近年市场需求量逐年上升。双氢他克莫司也是发酵他克莫司中的一个副产物，国外也作为新药的中间体来开发新型抗癌药物，抑制剂等。

国内在提取精制他克莫司时几乎没有厂家研究一步精制他克莫司药效组分他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素的方法。国外分离提取他克莫司时也未报道一步精制他克莫司药效组分他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素的研究，而且其在分离精制他克莫司时工艺往往复杂，用到两部或多部层析提纯，溶媒消耗多，产品收率少，关键是不能得到小产物子囊霉素及双氢他克莫司纯品物。一步精制高效他克莫司药效组分他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素在国内外未见报道，此技术研究尚属空白。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术中存在的缺陷或不捉，提供一种采用一步精制他克莫司粗品中药效组分他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素的独特方法。

本发明的技术方案为：

本发明为利用自主设计的不锈钢层析柱,高经比1：10，内置特制树脂填料体为层析柱。将80％含量的他克莫司粗粉通过特制溶剂溶解并过滤后定溶于他克莫司粗品含量为30万单位/ml由柱头上样，洗脱剂洗脱，分布收集他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素单组份，将纯组分浓缩后结晶，重结晶。他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素检测HPLC纯度都〉98％。本发明操作方便，工艺简单，成本低廉，收率高。已运用与中试投产，非常适合工业化生产。

本发明的具体技术方案：

一步法提纯精制他克莫司粗品中他克莫司，子囊霉素，双氢他克莫司的新方法其特征在于设计一种不锈钢层析柱,高经比1：10，内置特制树脂填料体为层析柱。将80％含量的他克莫司粗粉通过特制溶剂溶解并过滤后定溶于他克莫司粗品含量为30万单位/ml由柱头上样，分布收集他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素单组份，将纯组分浓缩后结晶，重结晶，他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素检测HPLC纯度〉98％。

具体步骤如下：