[发明专利]一种大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的指纹图谱检测方法，具体涉及大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法。

背景技术

大黄蛰虫丸由熟大黄、土鳖虫(炒)、水蛭(制)、虻虫(去翅足，炒)、蛴螬(炒)、干漆(煅)、桃仁、苦杏仁(炒)、黄芩、地黄、白芍、甘草十二味中药制成，具有活血破瘀，通经消痞的药理作用。该复方药味复杂，含有黄酮类、蒽衍生物类、苯丁酮、苷类、鞣质类等主要化学成分。大黄蛰虫丸含有的药物成分比较多，既有极性小的蒽醌类成分，又有糖苷、鞣质等极性大的化合物，保留时间相差较大，现有技术的分析方法不能全面、客观的检测和评价大黄蛰虫丸的质量。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价大黄蛰虫丸的质量，对控制大黄蛰虫丸的内在质量与保证临床疗效具有重要意义。

技术方案：为了实现以上技术目的，本发明采取的技术方案为：

一种大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法，该指纹图谱检测方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备：取大黄蛰虫丸粉末，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇或乙醇，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心取上清液，用0.22μm微孔滤膜过滤取滤液，制成供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：精密称取芍药苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、毛蕊花糖苷对照品，用甲醇或乙醇溶解，分别配置成适宜浓度的对照品储备液；

(3)高效液相色谱法测定本品的对照指纹图谱：取5～10批大黄蛰虫丸供试品在适当的色谱条件下进样，测得各批次供试品的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为本品的对照指纹图谱；

(4)取对照品溶液按步骤(3)相同的色谱条件进样，测得各对照品溶液的高效液相图谱；

(5)高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取步骤(1)供试品溶液按步骤(3)相同的色谱条件进样，测得供试品溶液的指纹图谱；并根据步骤(4)所得对照品溶液的高效液相图谱归属各色谱峰；

(6)将步骤(5)得到的供试品溶液指纹图谱和步骤(3)得到的对照指纹图谱用相似度软件评价。

作为优选方案，以上所述的大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法，步骤(3)色谱柱：Thermo C18色谱柱(规格)流动相：A相甲醇-B相0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长270nm；柱温：30℃；进样量10μL。

作为更优选方案，以上所述的大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法，步骤(3)梯度洗脱程序如下表：

作为更优选方案，以上所述的大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法，步骤(1)中供试品溶液制备方法为：取大黄蛰虫丸粉末1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声提取40min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心取上清液，用0.22μm微孔滤膜过滤取滤液，制成供试品溶液。

作为更优选方案，以上所述的大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(2)对照品溶液的制备：精密称取芍药苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和毛蕊花糖苷对照品各2g，用甲醇溶解，分别配置成1mg/mL的对照品储备液。

作为优选方案，以上所述的大黄蛰虫丸的指纹图谱检测方法，大黄蛰虫丸由熟大黄300g、土鳖虫(炒)30g、水蛭(制)60g、虻虫(去翅足，炒)45g、蛴螬(炒)45g、干漆(煅)30g、桃仁120g、苦杏仁(炒)120g、黄芩60g、地黄300g、白芍120g和甘草90g制成。如选用北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产的国药准字Z11020002的大黄蛰虫丸。以上指纹图谱Ⅰ的色谱条件优化实验：

色谱条件的筛选：

一、色谱柱选择

本发明分别考察了Thermo C18色谱柱((250mm×4.6mm i.d.，5μm)、Tigerkin C18柱(250mm×4.6mm i.d.，5μm)、Waters Atiantis T3(250mm×4.6mm i.d.，5μm)色谱柱对大黄蛰虫丸的分离效果。结果表明，Thermo C18色谱柱((250mm×4.6mm i.d.，5μm)柱对极性差异较大的化合物有很好的保留，故选择Thermo C18色谱柱((250mm×4.6mm i.d.，5μm)为指纹图谱分析用色谱柱。

二、检测波长选择