[发明专利]一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法

权利要求书

1.一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

S1、取脂肪组织清洗并剪碎，进行消化处理；

S2、取消化后的脂肪组织离心得到脂肪干细胞；

S3、将分离的脂肪干细胞加入培养基中重悬后进行分离培养；

S4、脂肪干细胞原代培养7-9d后进行体外扩增培养；

S5、制备明胶水凝胶，并将体外扩增的脂肪干细胞接种于水凝胶中得到包埋干细胞的水凝胶；

S6、取新鲜血液离心后得到富血小板血浆，加入包埋干细胞的水凝胶和生理盐水制备细胞制剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于：S1中所述消化处理的步骤为，将剪碎后的脂肪组织加入至消化液中，置于37℃恒温水浴箱中消化40-60min，消化结束后加入与消化液等体积的高糖DMEM终止消化。

3.根据权利要求2所述的一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于：所述消化液为0.25％的胰蛋白酶液和0.1％的胶原酶液以体积比1：1混合，所述高糖DMEM中含有体积分数为10％的胎牛血清。

4.根据权利要求1所述的一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于：S3中所述分离培养的步骤为，将S2中离心后的脂肪干细胞加入培养基中重悬，以2x10⁶个/L的密度接种于培养瓶中，置于37℃，5％CO₂，饱和湿度培养箱中培养，24h后第一次换液，之后每2d换液一次。

5.根据权利要求4所述的一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于：所述培养基为高糖DMEM培养基，其中含有体积分数为10％的胎牛血清、100U/mL青霉素及100U/mL链霉素。

6.根据权利要求1所述的一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于：S4中所述体外扩增培养的步骤为，S3中干细胞培养7-9d后，接种于新的培养瓶中进行体外扩增培养，扩增比例为1：3。

7.根据权利要求1所述的一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于：S5中所述制备明胶水凝胶的步骤为，称取明胶粉末溶解于磷酸缓冲溶液中配置成5％-6％的明胶溶液，将明胶溶液滴入六孔培养板中，每孔2mL，置于恒温培养箱中凝固1-2h。

8.根据权利要求1所述的一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于：S5中所述接种步骤为，取S4中体外扩增培养的脂肪干细胞以1x10⁶个/mL接种于明胶水凝胶中，置于恒温培养箱中培养68-72h，得到包埋干细胞的水凝胶。

9.根据权利要求1所述的一种用于皮肤损伤修复的细胞制剂的制备方法，其特征在于：S6中所述制备细胞制剂的具体步骤为，将富血小板血浆与生理盐水混合后加入S5中得到的包埋干细胞的水凝胶配制成细胞制剂，其中，所述包埋干细胞的水凝胶浓度为2x10⁶个/mL，富血小板血浆的体积分数为10％。