[发明专利]一种检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒。本发明所提供的检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒，包括包被的水产品中甲基睾酮与载体蛋白的偶联物，所述水产品中甲基睾酮的特异性抗体和酶标二抗。本发明的检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒为多残留检测试剂盒，对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批样品；最低检测限达0.31μg/L，可直接判断样品是否超标，具有高特异性、高灵敏度、高精确度、高准确度等特点，可在水产品中甲基睾酮残留检测中发挥重要作用。

技术领域

本发明涉及酶联免疫和兽药残留监测分析技术领域中的一种检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒。

背景技术

甲基睾酮（Methyltestosterone，MT），是一种人工合成的类固醇激素，具有增强雄性体性特征和促生长等作用。在水产养殖行业中为提高鱼体成活率高和增加产量，常在鱼苗培育过程中通过在鱼饲料或其它投入品掺入一定量的MT，实现鱼体的雄性化，达到单性养殖生产的目的。研究表明，MT在水产动物体内的代谢缓慢，痕量的残留可能会扰乱人体内激素平衡，导致肝中毒或其它重要组织器官发生生理病变，甚至具有潜在致癌作用。因此，欧美等多个国家将其列为水产养殖中的禁用药物，我国农业部在2002年颁布的235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》将其列为兽药残留的重要检测对象，规定在动物性食品的可食组织中不得检出MT。

目前，检测MT主要有高效液相色谱法(HPLC)，液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和免疫分析法(IA)等。其中仪器方法准确、灵敏，但分析时间长，设备相对昂贵，不适于现场快速筛选及检测。而免疫分析法，特别是基于抗原抗体反应的酶联免疫吸附法(ELISA)具有特异性强、灵敏、简便、准确和样品通量高等优点，非常适于现场快速检测，不过现有关于甲基睾酮的ELISA多以血液、尿液或毛发等为检测对象，针对养殖水产品中MT残留量测定的研究甚少。本研究在成功制备甲基睾酮半抗原和特异性抗体基础上，优化确定ELISA各项检测条件，同时结合分散固相萃取技术消除水产样品中的基质干扰。本方法操作简单、快速、灵敏度高，测定结果和液相色谱-质联用法呈现良好的相关性，为快速测定水产品中痕量残留的甲基睾酮提供一种有效的技术手段。

发明创造内容

本发明的目的是提供一种检测本发明的目的是提供一种检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒，包括包被的水产品中甲基睾酮与载体蛋白的偶联物，所述水产品中甲基睾酮的特异性抗体和酶标二抗。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括A ，B ，C ，D ，E ，F试剂液、G试剂液、H试剂液、I试剂液、J试剂液、K试剂液。

所述A ，B ，C ，D ，E ，F试剂液为甲基睾酮系列浓度标准溶液。

所述G试剂液为HRP 标记的羊抗兔 Ig G 抗体，武汉博士德生物工程有限公司。

所述H试剂液为抗体稀释度为 1/1.2×10⁵。

所述I试剂液为四甲基联苯胺。

所述J试剂液为PBS 缓冲液。

所述K试剂液为终止液。

所述甲基睾酮的特异性抗体为甲基睾酮单克隆抗体；所述甲基睾酮单克隆抗体为鼠源抗体，所述多西环素单克隆抗体优选为大豆凝集素鼠克隆抗体。

以上抗体均可用甲基睾酮与载体蛋白的偶联物作为免疫原按常规方法制备。

所述载体蛋白为所述载体蛋白可谓牛血清蛋白（BSA）等常用载体蛋白。

所述标记酶可谓辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶，优选为辣根过氧化物酶；所述二抗可为抗兔抗体。