[发明专利]一种抗福莫特罗单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗福莫特罗单克隆抗体、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及该抗体在检测福莫特罗上的应用，属于免疫学技术领域和兽药残留分析技术领域。

背景技术

福莫特罗(Formoterol)是由日本山之内制药株式会社中央研究所开发的第三代β₂-肾上腺素受体激动剂平喘药物，具有支气管扩张作用，还有抗过敏和抑制水肿的作用，可用于治疗慢性支气管哮喘、夜间哮喘、运动性哮喘、慢性阻塞性肺病以及儿童非哮喘性呼吸道疾病。近年来，随着我国对食品安全监管力度的加强，对违禁使用兽药的监管力度逐渐加大，滥用违禁兽药的现象有所控制，但是出现了使用生物活性相似的替代品代替重点监管兽药的新现象。新型“瘦肉精”福莫特罗与克伦特罗等三种常用“瘦肉精”物质具有同样的促进生长、增加瘦肉率的作用，2002年农业部1519号条例规定食品动物禁止使用β激动剂类药物作为饲料添加剂。福莫特罗检测手段滞后，尤其是快速检测产品缺乏，国家及各省市正在加紧建立新型“瘦肉精”物质的确证方法，同时也急需适合批量、快速筛选的检测产品，满足政府和企业的需要。

目前有关福莫特罗残留的检测技术主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)及免疫分析技术，前三种方法灵敏、准确，但操作繁琐，对实验设备和技术要求较高，不适合大批量样品的快速检测。免疫分析方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金免疫层析法(GICA)，具有灵敏度高、特异性好、成本低、操作方便等特点，适于大批量样品筛选。因此，抗福莫特罗单克隆抗体的制备对于动物性食品免疫快速检测方法的建立以及保障人类健康具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术缺陷，提供一种抗福莫特罗单克隆抗体，所述单克隆抗体对福莫特罗有特异性，所述抗单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C2016182的杂交瘤细胞株Formoterol-3E6产生。进一步的，本发明将该单克隆抗体应用于检测福莫特罗。

本发明所述技术问题是由以下技术方案实现的。

一种抗福莫特罗单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2016182的杂交瘤细胞株产生。该杂交瘤细胞株被命名为杂交瘤细胞株Formoterol-3E6，于2016年10月26日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏号为CCTCC NO:C2016182。

上述抗福莫特罗单克隆抗体效价为1:512000，亚型为IgG₁，亲和力常数Ka＝7.24×10⁸L/mol，对福莫特罗抑制率IC₅₀为1.1μg/L，与福莫特罗的交叉反应率为100.00％，与其它几种相似物(苯乙醇胺A、沙丁胺醇、妥布特罗、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、西马特罗)无交叉反应；

上述福莫特罗单克隆抗体在用于配制检测生物样品中的福莫特罗的非诊断目的检测产品中的应用。

上述应用，所述非诊断目的检测产品为酶联免疫试剂盒或胶体金层析试纸条。

进一步的，一种检测福莫特罗的酶联免疫试剂盒，该试剂盒中含有所述的抗福莫特罗的单克隆抗体。

一种检测福莫特罗的胶体金层析试纸条，该试纸条中含有所述的抗福莫特罗的单克隆抗体。

一种制备上述福莫特罗单克隆抗体的方法，包括如下步骤：

(1)制备福莫特罗抗原工作液：

(a)活化对氨基苯甲酸的制备：称取6mg亚硝酸钠，溶在0.35mL蒸馏水中，然后称取10mg对氨基苯甲酸，溶入1.1mL 1mol/L的盐酸中，冰浴搅拌，将上述亚硝酸钠溶液逐滴加入到对氨基苯甲酸溶液中，避光反应1h，得到活化对氨基苯甲酸；

(b)带有羧基的福莫特罗活性中间体的制备：称取福莫特罗30mg溶在5mL、0.05mol/L冰冷的硼砂缓冲溶液中(pH＝9，含0.15mol/L的氯化钠)，冰浴搅拌，将此溶液逐滴加入到活化对氨基苯甲酸溶液中，4℃避光反应3h，得到带有羧基的福莫特罗活性中间体溶液；