[发明专利]一种白僵菌分离扩繁方法

权利要求书

1.一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(1)白僵菌孢子液制备：用无菌接种环从白僵蚕表面挑取3—4环分生孢子粉，置于无菌水中，振荡10—15min，直至均匀，得白僵菌孢子液；

(2)分离纯化培养：将步骤(1)得到的白僵菌孢子液接种于选择培养基中，在25—26℃条件下培养4—6天，得白僵菌菌种，所述选择培养基的组分包括：PDA培养基，补充龙胆紫、苯菌灵、脱氧胆酸钠、头孢霉素、放线菌酮、多果定中的至少一种；

(3)一次扩大培养：将步骤(2)得到的白僵菌菌种接种于液体培养基中，在24—25℃、振荡条件下培养2—3天，得到白僵菌菌丝体，所述液体培养基的组分按重量份数计包括：葡萄糖4—6份、马铃薯汁5—10份、蛋白胨2—10份、头孢霉素1—2份、BaCl₂1—2份、CaCl₂1—2份、无菌水20—80份；

(4)二次扩大培养：将步骤(3)得到的白僵菌菌丝体接种于固体培养基中，在25—26℃条件下培养5—9天，得到扩繁后的白僵菌，所述固体培养基的组分按重量份数计包括：葡萄糖2—5份、豆粕3—8份、玉米粉10—20份。

2.根据权利要求1所述的一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：步骤(2)中所述选择培养基的组分包括：PDA培养基，补充苯菌灵、脱氧胆酸钠、头孢霉素中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：步骤(2)中所述选择培养基的组分按重量份数计包括：PDA培养基，补充脱氧胆酸钠2—4份、头孢霉素3—5份。

4.根据权利要求2所述的一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：步骤(2)中所述选择培养基的组分按重量份数计包括：PDA培养基，补充苯菌灵1—2份、脱氧胆酸钠2—4份。

5.根据权利要求1所述的一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：步骤(3)所述液体培养基的组分按重量份数计包括：葡萄糖5份、马铃薯汁7份、蛋白胨8份、头孢霉素2份、BaCl₂1份、CaCl₂2份、无菌水70份。

6.根据权利要求1所述的一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：步骤(4)所述固体培养基的组分按重量份数计包括：葡萄糖3.5份、豆粕7份、玉米粉15份。

7.根据权利要求1所述的一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：所述白僵菌孢子液制备步骤之前，先将白僵蚕表面用75％酒精消毒，再置于无菌培养皿中培养4—5天，直至白僵蚕表面长出菌丝和分生孢子。

8.根据权利要求1所述的一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：步骤(2)所述选择培养基的制备方法为：取灭菌后冷却至65—68℃的PDA培养基，加入龙胆紫、苯菌灵、脱氧胆酸钠、头孢霉素、放线菌酮、多果定中的至少一种，待冷却至40—45℃时，再加入硫酸卡那霉素，待所述选择培养基凝固即可。

9.根据权利要求1所述的一种白僵菌分离扩繁方法，其特征在于：所述二次扩大培养的湿度控制在92—94％。