[发明专利]海洋微宇宙体系及构建方法和快速评估海洋中溢油污染物生物毒性的方法

权利要求书

1.一种快速评估海洋中溢油污染物生物毒性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(a)、首先平行构建海洋微宇宙体系：

准备18个5L的烧杯，其中，每个烧杯中分别加入200g石英砂、0.5g几丁质、0.5g纤维素以及3Lf/2培养基；

将烧杯置于20-22℃，光照强度为3000lux的环境中，并维持光周期为光照12h：黑暗12h；

然后，分别向烧杯中接种青岛大扁藻、三角褐指藻、海水小球藻、米氏凯伦藻、中肋骨条藻、小新月菱形藻、东海原甲藻、链状亚历山大藻、旋链角毛藻、海洋原甲藻、球等鞭金藻以及念珠直链藻12种藻类，并使得烧杯中藻类的初始细胞浓度为10⁴cells/mL；

然后，在4d后，加入褶皱臂尾轮虫以及中华哲水蚤，并使得烧杯中褶皱臂尾轮虫以及中华哲水蚤的数量均为0.03个/ml；

最后，在7天后，向烧杯中分次加入提前在海水溶液中适应的鯷鱼幼鱼、海洋青鳉鱼幼鱼以及凡纳滨对虾幼体，其中，每种的加入量均为6条/L，构建得到海洋微宇宙体系；

(b)、然后将不同浓度的石油污染物分别加入平行构建的海洋微宇宙体系中，并使得石油污染物均匀暴露于所述平行构建的海洋微宇宙体系中某一相或者多项基质中，然后进行危害测试：

取石油原油，并在避光条件下与已过滤灭菌的海水按体积比1∶9进行混合；然后，在避光条件下，将混合体系在室温下用磁力搅拌机连续搅拌24h，并将将搅拌后的混合体系转移至分液漏斗中静置4h，将下层水相分离并收集，即为石油污染物母液，并母液置于4℃避光保存；

然后，进行紫外分光光度法测定其浓度，并分别取适量污染物母液0.5mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L，即为不同浓度的石油污染物；

然后，将18个微宇宙体系随机分为6组，每组3个，并在第1组的3个微宇宙体系中分别加入适量0.5mg/L浓度的石油污染物；同时，在第2、第3、第4、第5组的3个微宇宙体系中分别加入适量2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L浓度的石油污染物，并使得石油污染物均匀暴露于所述平行构建的海洋微宇宙体系中某一相或者多项基质中；同时，在第6组中加入等量过滤灭菌的海水作为对照组；

(c)、并定期检测平行构建的海洋微宇宙体系的系统结构和功能以及内环境指标：

每隔24h对各组微宇宙体系进行取样检测，并记录统计每次检测各微宇宙中海藻数量、褶皱臂尾轮虫和中华哲水蚤数量以及仍然存活的鯷鱼、海洋青鳉鱼以及凡纳滨对虾数量，并进行记录统计，并分别计算各微宇宙体系中褶皱臂尾轮虫、中华哲水蚤、鯷鱼、海洋青鳉鱼以及凡纳滨对虾的平均死亡率；

(d)、进行对照评估：

当处于低污染水平，即石油污染物浓度0.5mg/L时，石油污染物对于微宇宙体系内海洋生物和生态环境的影响就已经比较明显了；当石油污染物的浓度达到2.5mg/L或者5mg/L时，此时石油污染物对于微宇宙体系生态环境以及生态平衡的影响十分明显；而当石油污染物达到10mg/L或者20mg/L的高浓度水平时，微宇宙体系内生态平衡完全被打破，海洋生物几乎无法生存，生态环境十分恶劣；

进而得到，当表层海域体系内石油浓度达到0.5mg/L时，就会影响表层海域体系内的生态环境以及生态平衡；当石油浓度达到2.5～5mg/L时，表层海域体系内的生态环境和生态平衡就会受到十分明显的影响；当石油浓度达到10mg/L或者更高的水平时，表层海域体系内就会完全生态失衡，海洋环境不适于海洋生物的生存和生长。