[发明专利]农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化系统

权利要求书

1.农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，步骤包括：

(1)耐盐椒样薄荷茎段预培养；

(2)农杆菌介导的外源基因转化；

(3)共培养；

(4)丛生芽再生与抗生素筛选；

(5)生根诱导和阳性植株检测；

其中，步骤(2)中转化液为0.2MS+0.5g/L 2-(N-吗啡啉)乙磺酸+30mg/L乙酰丁香酮+1％葡萄糖+2％蔗糖，pH 5.4。

2.根据权利要求1所述的农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，步骤(1)所用耐盐椒样薄荷茎段为含腋芽茎段，并用无菌刀片在腋芽处轻轻划几刀，使其具有损伤易于转化和丛生芽分化，然后将茎段放入预培养的培养基中黑暗条件下预培养3天。

3.根据权利要求2所述的农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，预培养所用培养基为：MS+3.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+20g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH 5.8。

4.根据权利要求1所述的农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，步骤(2)农杆菌介导的外源基因转化的方法是：将预培养的耐盐椒样薄荷茎段置于用转化液重悬的农杆菌菌液中，菌液调整OD600为0.6-0.8，抽真空10-15min，然后黑暗条件下30℃，200r/min震荡培养30min。

5.根据权利要求1所述的农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，步骤(3)的方法为：抽真空转化的耐盐椒样薄荷茎段置于共培养培养基上，25±3℃暗培养3-4d。

6.根据权利要求5所述的农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，共培养培养基为：MS+30mg/L乙酰丁香酮+20g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH 5.8。

7.根据权利要求1所述的农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，步骤(4)丛生芽再生与抗生素筛选的方法为：共培养的耐盐椒样薄荷茎段用无菌水清洗后，转至添加头孢和筛选标记抗生素的丛生芽诱导培养基上诱导丛生芽再生。

8.根据权利要求7所述的农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，丛生芽再生和筛选和培养基为：MS+3mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.2mg/L萘乙酸+200mg/L头孢+抗生素+20g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH 5.8。

9.根据权利要求1所述的农杆菌介导的耐盐椒样薄荷茎段转化方法，其特征在于，步骤(5)所述生根诱导和阳性植株检测中，生根诱导培养基为：1/2MS+0.2mg/L萘乙酸+10g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH 5.8，阳性植株检测为利用基因组DNA进行PCR检测。