[发明专利]一种磷脂酶C突变体

说明书

本发明提供一种磷脂酶C突变体。具体而言，本发明提供一种分离的氨基酸序列，所述氨基酸序列含有：(1)SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列；或(2)在(1)所述的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，同时保留SEQ ID NO：8所具备的磷脂酶C活性的由(1)衍生的多肽。本发明也涉及所述氨基酸序列的编码序列、核酸构建体、宿主细胞以及相应的用途。

技术领域

本发明涉及磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C突变体及其用途，具体地涉及通过分子生物学中的突变筛选方法获得的磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C突变体及其用途。

背景技术

脱胶是油脂精炼的一个重要步骤，而传统的水化脱胶法经济成本高，物料能耗大，环境污染重，所以近些年，很多努力致力于将酶法脱胶用于油脂精炼中的脱胶环节，并取得了很大的进展。同传统方法相比,酶法脱胶能够提高经济效益，做到节能减排，对生态环境污染少，在环保、经济、质量等方面具有较大的优势。油脂脱胶所用的酶即为磷脂酶。磷脂酶具备水解一个或多个甘油磷脂酯键的能力，它代表着一类脂肪酶、酰基水解酶和磷酸酯酶。磷脂酶根据该酶在磷脂分子上作用位点的不同，可以分为磷脂酶A1(PLA1)、磷脂酶A2(PLA2)、磷脂酶C(PLC)和磷脂酶D(PLD)。

磷脂酶C(Phospholipase C，简称PLC)，是一种能够水解甘油磷脂C3位点磷脂酰键生成甘油二酯和磷酸胆碱、磷酸肌醇、磷酸乙醇胺等的脂类水解酶。磷脂酶C广泛存在于动植物和微生物中，动植物来源PLC一般位于细胞膜上，结构较为复杂，属于内源性磷脂酶C，难以分离。同其他脱胶酶相比，磷脂酶C(PLC)表现出更大的优势，比如，增加甘二酯(DAG)的得率，以及减少得油量的损失。

微生物来源的磷脂酶C结构一般较为简单，这些酶已经从各种微生物中分离得到，细菌来源的较多包括产气荚膜梭菌Clostridium perfringens〔Yun T,Siebel C.Cloningand expression of the PLC gene from Clostridium perfringens and Clostridiumbifermentants[J].Infection and immunity,1989,2:468-476〕、双酶梭菌C.bifermentans、Burkholderia pseudomallei、Bacillus cereus、蕈状芽孢杆菌Bacillusmycoiddes、苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis、单核细胞增多性李斯特氏菌Listeria monocytogenes、铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、荧光假单胞菌P.fluorescens、葡萄球菌Straphylococus aureus、鲍氏不动杆菌Acinetobacterbaumannii、链霉菌Streptomyces clavuligerus、伯克氏菌属Burkholderi等等。来自放线菌的有八丈岛链霉菌Streptomyces hachijyoensis等。还有来自酵母菌的白色念珠菌Candia albicans〔Analuz E,Juan-Jose R,Rosario Cueva.Sequencing of a 4.3kbpregion of chromosome 2of Candida albicans reveals the presence of homologuesof SHE9from Saccharomyces cerevisiae and of bacterial phosphatidylinostiol-phospholipase C[J].Yeast,2001,18(8):711-721〕、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae〔Payne W,Fitzgerald-Hayes M.A mutation in PLC1,a candidate phosphoinositidespecific phospholipase C gene from Saccharomyces cerevisiae,causes aberrantmitotic chromosome segregation[J].Molecular and Cellular Biology,1993,13:4351-4364〕等。