[发明专利]一种促进毛发再生的细胞营养液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种促进毛发再生的细胞营养液的制备方法，具体涉及一种人源性细胞因子生发营养液及其制备方法。

背景技术

近年来，随着社会竞争增加以及环境日益恶化，脱发发生的比例呈上升态势，并且年轻化趋势明显。目前国内外用于治疗脱发的药品主要为西药，如米诺地尔，其经头皮吸收后可扩张头皮下血管，改善毛囊周围的微循环，减少毛囊周围炎症细胞浸润，从而使萎缩的毛囊增大并促进毛发的生长，使毳毛变成终毛；此外，非那雄胺是一种能抑制5α-还原酶的活性以阻止雄性激素合成的药物。但米诺地尔和非那雄胺主要是针对雄激素性脱发有较好的疗效，有一定局限性，且要长期用药，对人体会产生副作用。国内也有很多主要成分为中药的产品，但是由于其成分单一，没有从毛囊生理性生长的角度去解决问题，所以效果并不显著。

随着对毛囊微观结构及毛发再生机理研究的深入，人们发现毛发再生受到毛囊自身干细胞及毛囊周围干细胞微环境的综合调控。干细胞是一类具有自我复制，自我更新的原始细胞，具有向多种组织细胞分化的能力，在体内能通过分泌多种调控因子从而调节组织器官的正常生理代谢。因此，开发针对于毛囊部位干细胞微环境修复的再生产品成为治疗脱发药物的发展趋势。

中国专利CN200510048870.7公开了“一种治疗斑秃药物的制备方法”采用含人AB型血清的基础培养基培养低传代人毛乳头细胞，收集低传代人毛乳头细胞培养上清，将所收集上清液制备成冻干粉。此发明所制备的药物在治疗斑秃中有明显的疗效，且本药物所用细胞和培养血清对人体均无抗原性，克服激素治疗斑秃给人体带来的副作用。但毛乳头细胞的获得是取意外死亡的正常健康青年枕后一手掌大小头皮，而且只能使用低传代人毛乳头细胞的培养上清来制备冻干粉，其取材受限从而注定不能用于临床推广。

中国专利CN101336932A公开了“一种猪毛乳头细胞培养上清的药物在治疗秃发中的应用”采用含人AB型血清的基础培养基培养低传代猪毛乳头细胞，收集细胞培养上清，将所收集的上清液制备成冻干粉用于秃发的治疗。由于猪毛乳头细胞来源广泛，因此可以解决人毛乳头细胞来源有限这一瓶颈，为产业化应用于临床治疗秃发奠定了基础。但是，猪的毛发并不像人的毛发能不断长长，因此，其毛发生长的干细胞调控机制及干细胞微环境和人的毛发生长存在差异，细胞培养后有效成分的种类和含量也存在差异，不利于临床使用。

综上所述，由于现有生发药物不能从细胞再生的角度去解决脱发问题，而现有细胞条件培养液生发成分由于取材受限或者不能用于临床推广，因此，开发一款能从生发本质上解决脱发问题，并且利于临床使用的治疗脱发的药物迫在眉睫。

发明内容

本发明的发明目的在于提供一种促进毛发再生的细胞营养液的制备方法，主要解决了现有技术中不能从细胞再生的角度去解决脱发问题，同时现有细胞培养液生发成分由于取材受限无法用于临床推广。

本发明的技术方案具体如下：所提供的促进毛发再生的细胞营养液的制备方法，包括以下步骤：

1]ADSCs的原代分离

将脂肪组织离心处理，去除液体部分，得固态的脂肪颗粒；然后将脂肪颗粒去除结缔组织，剪碎，加入生理盐水进行清洗，离心，去除液体部分，得固态的脂肪颗粒；再加入生理盐水配置的胶原酶溶液，震荡，收集消化液，离心，去除上清，取细胞沉淀；再加入生理盐水，离心，对细胞进行清洗，取细胞沉淀，用1-10ml培养液重悬，接种于培养瓶中，置于恒温培养箱中进行培养；其中，脂肪组织离心目的实去除抽脂前麻醉过程中注射的肿胀液，使脂肪组织纯度更高；去除结缔组织并将组织块剪碎是使胶原酶对脂肪组织消化更充分。

2]ADSCs的扩大培养

将步骤1所得的原代脂肪细胞培养5-7天后，弃去培养液，用PBS清洗一次，用胰酶消化后，根据细胞密度进行1:2-3传代培养(当细胞密度比较大时，进行1:3传代培养；当细胞密度比较小时，进行1：2传代培养)，之后每48-72h传代一次；

3]ADSCs的诱导培养