[发明专利]一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于油脂测定领域，具体涉及一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法。

背景技术

食用动植物油的主要组成成分为甘油三酯，其含量占总脂类的95％以上，5％为其他脂类，如甘油二酯，单甘油酯，脂肪酸、磷脂、糖脂和固醇类等。甘油三酯是由一分子甘油和三分子脂肪酸通过酯化反应生成，酯化的脂肪酸分别位于α和β位，其化学结构式如附图2。

天然存在的油脂由于来源、脂肪酸种类和含量，碳链长短、双键数目、双键位置的差异而具有不同的理化性质和流变特性。不仅如此，脂肪酸在甘三酯中的位置分布决定着甘三酯的消化，吸收，代谢及营养价值。例如：棕榈酸(C16：0)是母乳中的主要脂肪酸组分(占总脂肪酸25％)，其中≥65％位于β位置上，被胰脂酶水解形成β-甘一酯，与胆盐形成乳糜微粒而被机体吸收。而牛乳和婴儿配方乳中的棕榈酸主要分布在α位，其被胰脂酶水解为游离脂肪酸，易与Ca 2+形成钙皂，不能被人体很好地吸收利用。而甘三酯中的油酸(C18：1)位于α位时更容易被机体利用，提供能量。另外，硬脂酸(C18：0)处于α位时不具有升高血脂和胆固醇的作用，而位于β位时则与肉豆蔻酸(C 14：0)和棕榈酸(C 16：0)一样具有升高血液胆固醇作用。同时，酰化位置对血浆脂肪酸分布也有重要影响，因此油脂中脂肪酸组成固然重要，但脂肪酸的位置分布也不容忽视，这就需要对油脂中脂肪酸的位置分布进行测定。

目前，国内外开展了大量的关于甘三酯α或β位脂肪酸检测技术的研究工作。常用的测定甘三酯中脂肪酸位置分布的方法有胰脂酶水解法和格氏降解法。胰脂酶水解法是根据胰脂酶的α特异性，通过水解甘三酯α位上的脂肪酸，对β-甘一酯进行测定，分析脂肪酸的位置分布的一种常用的酶解方法。然而，胰脂酶水解具有脂肪酸和立体区位选择性，尤其是对多不饱和脂肪酸和中短链脂肪酸，所以，无法准确分析这些脂肪酸的位置分布。另一种方法是格氏降解法，格氏反应将甘三酯α位酯化脂肪酸降解，对生成的甘二酯进行测定，从而计算出脂肪酸位置分布的一种化学方法。此方法可以避免胰脂酶对脂肪酸的选择性水解，但是，烯丙基溴化镁遇水极易失活，且具有毒性。因此，探索其他 脂肪酶特异性水解动植物油脂检测甘三酯α位脂肪酸组成的方法，对深入分析动植物甘三酯的结构有重要意义。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法中存在的问题，提出了本发明。

因此，本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于，包括，对动植物油中甘三酯进行层析分离并收集甘油三酯，将其用脂肪酶水解后，对水解产物经薄层层析分离，确定α游离脂肪酸并收集进行衍生化处理，进气相色谱检测，测定甘油三酯中α位脂肪酸的组成及含量。

作为本发明所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述层析分离，其是采用硅胶柱层析分离，其中，柱层析洗脱液为石油醚和乙醚，其体积比为80～90：10～15，洗脱速度为1～3ml/min。

作为本发明所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述脂肪酶水解，其是加入脂肪酶、胆酸钠、CaCl_2:，在37～55℃下，保持15～25min，然后在3000～5000r/min的条件下，离心5min。

作为本发明所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述脂肪酶为米根霉发酵生产的α特异性脂肪酶，其添加量为甘油三酯质量的5～15％。

作为本发明所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述脂肪酶水解，还加入MgCl₂，且满足添加后Mg²⁺在混合液中的浓度为3～4mmol/L。