[发明专利]全局肿瘤标志物表达水平的检测方法

权利要求书

1.一种全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

用CD14和CD16的抗体标记出待检测对象外周血中的CD14⁺CD16⁺细胞，去除除白细胞之外的大部分杂质后用待检测的抗肿瘤标志物X的抗体标记该肿瘤标志物；

检测X⁺CD14⁺CD16⁺细胞与CD14⁺CD16⁺细胞的数量并统计前者与后者细胞数量的比值。

2.根据权利要求1所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述肿瘤标志物X为TKTL1和/或DNASE1L1。

3.根据权利要求1或2所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述去除除白细胞之外的大部分杂质的方法为：

用裂解液裂解所述外周血中的红细胞，并通过离心去上清的方法去除除白细胞之外的大部分杂质。

4.根据权利要求3所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述裂解液含有8mM～12mM Tris-HCL、8mM～12mM NaH₂PO₄和/或NaHPO₄、120mM～140mM NaCl、体积百分数为0.7％～1.3％的Triton X-100、8mM～12mM Na₄P₂O₇·10H₂O，pH＝7.2～7.7。

5.根据权利要求4所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述裂解的温度为0℃～4℃，时间为15min～25min。

6.根据权利要求5所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述离心的条件为700g～900g，4min～6min。

7.根据权利要求1或2所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述抗CD14和CD16的抗体为具有不同荧光颜色的荧光抗体；

当所述抗肿瘤标志物X的抗体为荧光抗体时，其荧光颜色与所述抗CD14和CD16的抗体的荧光颜色不同；

当所述所述抗肿瘤标志物X的抗体为非荧光抗体时，其对应的荧光二抗的荧光颜色与所述抗CD14和CD16的抗体的荧光颜色不同。

8.根据权利要求7所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述用抗CD14和CD16的抗体标记出所述外周血中的CD14⁺CD16⁺细胞的具体方法为：

向所述外周血中加入抗CD14和CD16的荧光抗体，避光孵育10min～20min后加入固定剂进行固定；

优选的，所述固定剂为甲醛和甲醇的混合溶液；且以体积百分数计，加入固定剂后反应体系中所述甲醛的终浓度为0.4％～0.6％，所述甲醛的终浓度为0.15％～0.19％。

9.根据权利要求8所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述用抗肿瘤标志物X的抗体标记肿瘤标志物X的具体方法为：

将抗体标记肿瘤标志物X的抗体与封闭打孔试剂一起加入去除除白细胞之外的大部分杂质后的反应体系中；

所述封闭打孔试剂为0.008g/mL～0.012g/mL的BSA和体积百分数为0.7％～1.3％的Triton X-100溶液；所述封闭打孔试剂的添加量为每100μL外周血样本添加40μL～60μL封闭打孔试剂。

10.根据权利要求1或2所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，在步骤3)中，所述检测X⁺CD14⁺CD16⁺细胞与CD14⁺CD16⁺的细胞数量的方法为流式细胞仪检测法或荧光细胞计数仪检测法。