[发明专利]一种采用钙黄绿素标记斑马鱼胃肠道的方法有效
| 申请号： | 201610286065.6 | 申请日： | 2016-05-03 |
| 公开（公告）号： | CN105709242B | 公开（公告）日： | 2018-10-26 |
| 发明（设计）人： | 孙晨;韩建;韩利文;王雪;王荣春;侯海荣;陈锡强 | 申请（专利权）人： | 山东省科学院生物研究所 |
| 主分类号： | A61K49/00 | 分类号： | A61K49/00 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250014 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 采用 黄绿 标记 斑马 胃肠道 方法 | ||
1.一种采用钙黄绿素标记斑马鱼胃肠道的方法，其特征在于，步骤如下：
（1）挑选受精144hpf发育正常的斑马鱼胚胎，放入含有培养液的培养容器中，加入钙黄绿素溶液，调钙黄绿素的质量浓度为0.15%～0.25%；
（2）在23℃～27℃的恒温条件下避光孵育斑马鱼胚胎9～11min，然后用培养液清洗，制得标记后的斑马鱼胚胎；
（3）将步骤（2）制得的标记后的斑马鱼胚胎麻醉，利用图像采集工具，对斑马鱼胚胎中显示黄绿荧光的胃肠道部分进行影像采集并保存。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述斑马鱼胚胎为健康野生型AB系斑马鱼胚胎。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，培养容器为标准规格的细胞培养板。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述培养容器为标准规格的6孔或12孔细胞培养板。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所用钙黄绿素溶液的质量浓度为0.2%。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）和（2）中，所述培养液为胚胎培养水，包括如下组分：
NaCl 5mM，KCl 0.17mM，CaCl2 0.4mM，MgSO4 0.16mM，去离子水配制。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，避光孵育的恒温条件为25℃。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，避光孵育斑马鱼胚胎的时间为10min。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，培养液清洗次数为2～3次。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，麻醉采用的麻醉剂为三卡因。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述麻醉剂的使用质量浓度为0.02%。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，影像采集工具为荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
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